[00697543]伪狂犬病毒鄂A株系列基因缺失株和基因缺失疫苗

伪狂犬病是当今危害全球养猪业最严重的传染病之一，给全球养猪业造成巨大的经济损失。该病在中国广泛存在，并严重发病，损失巨大。针对这一情况，“九五”期间我们承担了中国生物工程开发中心生物技术攻关项目“伪狂犬病基因缺失疫苗研制”专题。用自己从湖北省发病猪病料中分离、鉴定、筛选到在细胞上增殖滴度高、免疫原性好的伪狂犬病毒鄂A地方标准毒株为亲本，采用病毒分子生物学与基因工程的方法与原理，构建了鄂A株TK-/LacZ+、TK-、gG-/LacZ+、gE-、TK-/gG-/LacZ+和TK-/gE-等6株基因缺失重组病毒，其中gG-和gE-两株单基因缺失疫苗毒株作为灭活疫苗的候选毒株用于种猪免疫，TK-/gG-/LacZ+和TK-/gE-两株双基因缺失疫苗毒株作为弱毒疫苗的候选毒株用于仔猪和育肥猪的免疫。其中TK-/gG-/LacZ+毒株已按新兽药证书的要求完成了各项实验室研究和中试与区域实验，已通过农业部基因工程生物安全性评价，申报了新兽药证书。通过在全国范围内大量的中试与区域实验以及专门的动物实验充分证实，该疫苗无论从产生的抗体水平、发挥作用时间快、安全性等方面都超过国外同类产品。同时还获得出乎意料之外的好效果是该疫苗可用于发病仔猪的紧急预防注射可在16～24小时内产生极显著的效果，采用超前免疫效果更佳。这是其它同类产品所不能比拟的。 在原核大肠杆菌，真核酵母系统和杆状病毒表达系统中表达了伪狂犬病毒鄂A株糖蛋白gG和gE基因，用其表达产物建立了gG-ELISA(酶联免疫吸附试验)、gG-LAT(乳胶凝集试验)、gE-ELISA和gE-LAT，在临床注射上述的基因缺失疫苗后，由于缺失疫苗中缺失了gG基因或gE基因，注射动物后就不能产生抗gG或gE的抗体，但野毒则有，应用相应的鉴别诊断方法进行血清学检测，可以将注射疫苗猪与自然感染野毒猪区分开来，在临床上逐步淘汰野毒感染猪，建立健康猪群，最终根除伪狂犬病。此项目所获得的基因缺失疫苗与鉴别诊断方法为中国制定和启动伪狂犬病的根除计划，最终消灭此病提供了强有力的技术保障。经查新和全国同行知名专家鉴定，该项成果处于国内领先、国际先进水平，其中基因工程表达产物建立的乳胶凝集鉴别诊断技术填补了国内外空白。鉴别乳胶凝集试验具有敏感性高，特异性强，操作简便，便于基层和现场使用。