[00374811]猪流行性腹泻病毒遗传变异分析及快速检测

该项目属于畜牧兽医技术领域，涉及到动物传染病学、兽医临床诊断学、分子生物学等多个学科。主要应用于猪场健康养殖，减少仔猪流行性腹泻病的发生，保障仔猪健康。实验室研究开始于2011年10月，2013年开始进行临床应用。该项目主要进行了以下研究：在猪流行性腹泻病毒遗传变异分析过程中，选择M基因为研究对象，分离扩增华北猪流行性腹泻流行毒株，进行M基因的扩增和序列分析，并比较与疫苗毒株CV777的进化关系。将M基因进行原核表达，将表达的蛋白纯化后，作为检测抗原包被ELISA板，研制检测猪流行性腹泻抗体的ELISA试剂盒，用于免疫程序中日龄的选择和免疫后效果的评价。通过将表达的M蛋白免疫小鼠，制备抗M蛋白的单克隆抗体，然后利用将该单克隆抗体进行金标，制备检测猪流行性腹泻病毒的胶体金检测试纸条，用于该病毒的临床检测。与其他方法相比，简单快捷。 2015年12月20日，河北省教育厅组织并主持，邀请同行专家组成以河北省畜牧兽医学会理事长李英为主任委员的七人鉴定委员会，对该项目进行了成果鉴定，鉴定委员会听取了项目工作报告、技术报告、经济效益分析报告，审查了查新报告等有关资料，经质疑答辩和讨论，一致认为该项研究成果达到国际先进水平。且具有以下3点创新：探明了河北省猪流行性腹泻病毒当前流行株的遗传变异特点。制备了猪流行性腹泻病毒当前流行株的M蛋白，建立了以M蛋白为包被抗原的猪流行性腹泻ELISA抗体检测方法。制备了猪流行性腹泻病毒当前流行毒株M蛋白的单克隆抗体，研制了检测猪流行性腹泻病毒的胶体金免疫层析试纸条。项目组将取得的各项技术集成后于2013年-2015年在河北省石家庄市、保定市、邯郸市、邢台市、秦皇岛市、张家口市、沧州市等地进行了推广应用，使仔猪流行性腹泻的发病率降低了6.7%。仔猪死亡率降低了5.8%，降低了仔猪腹泻给猪场带来的损失，提高了经济效益，新增利润9600多万元。该项目培养硕士研究生2名，发表论文7篇，出版著作1部。 鉴于仔猪腹泻病因较多，一旦发生腹泻，临床上都表现为腹泻、脱水、消瘦和急性死亡，因此很难通过临床诊断对猪流行性腹泻进行确诊，该研究建立的胶体金免疫层析试纸条，可以对猪流行性腹泻病毒进行检测，利于临床疫病的定性诊断。另外，近年来该病的疫苗预防效果较差，该研究对河北省猪流行性腹泻病毒进行了遗传背景分析，结果显示与传统疫苗株CV777距离较远，也为临床上疫苗的选择提供了依据，建立的ELISA检测方法，不但可以检查疫苗免疫效果，而且可以对免疫程序进行评估，因而该项目既有很高的理论价值，又有很强的实践意义，促进了养猪产业的发展，取得了较好的经济、社会和生态效益，具有广阔的推广应用前景。