[00363240]小鹅瘟病原分离鉴定与防治技术

课题通过鹅场发生的疑似小鹅瘟的病例采集脾脏，研磨后过滤除菌，接种鹅胚，收集死亡的鹅胚尿囊液，传代后通过电镜观察、琼脂扩散试验、回归试验等证实获得一株鹅细小病毒。参考GenBank内的基因序列，针对GPVVP2基因和NS1基因设计两对特异性引物，使用Trizol试剂提取小鹅瘟病毒HBZF07株的基因组，进行PCR特异扩增，获得了VP2基因和NS1基因的全基因片段，将小鹅瘟病毒VP2基因连接入pet28a载体，转化入大肠杆菌内进行表达，并对表达的蛋白进行鉴定和纯化，建立了ELISA检测方法，为小鹅瘟免疫效果检测提供了一种快速敏感的技术。参考小鹅瘟病毒B株保守序列，设计了一对引物，进行PCR扩增条件探索，分别扩增出预期的350bp片段，并且进行了敏感性试验，特异性等。该研究建立的PCR方法，可以在2.5h内对样品进行快速鉴别检测，可作为GPV感染和临床样品检测的可靠手段。检测不同免疫程序下鹅体内小鹅瘟抗体水平，优化免疫程序，提高了免疫效果。课题研究对小鹅瘟的诊断，预防和治疗都有积极意义。