技术详细介绍
本发明公开了一种具有脑靶向作用的多亚基蛋白质及其制备方法、用途。
利用不相容的双质粒系统在大肠杆菌中表达霍乱毒素B亚基，和增强型绿色荧光蛋白、霍乱毒素A亚基、穿膜肽三种蛋白的融合蛋白EGFP-CTA2-TAT，通过PCR扩增得到CTB基因，将该基因片段克隆到载体pET-28a中，获得重组质粒pET-28a-CTB；以野生型CTA2、EGFP、TAT氨基酸序列为模板，在EGFP与CTA2之间插入3个酶切位点和linker，优化获得适宜在大肠杆菌中表达的密码子，将基因片段克隆到载体PET-22b（+）中，获得重组质粒PET-22b-EGFP-CTA2-TAT；利用PET-28a-CTB和PET-22b-EGFP-CTA2-TAT二者不同抗性，将其共转化到大肠杆菌BL21中，在氨苄青霉素和卡那青霉素的双抗性选择压力下，筛选获得工程菌，该工程菌经IPTG诱导表达后，可获得CTB5/EGFP-CTA2-TAT嵌合蛋白。
本发明同时公开了该蛋白质的制备方法及用途。