技术详细介绍
1． 项目背景
近年来，随着分子生物学技术的进展和从细胞受体与增殖调控的分子水平对肿瘤发病机制认识的进一步深入，针对细胞受体、关键基因和调控分子为靶点的治疗开始进入临床，人们称之为"分子靶向治疗"。 这些领域包括具有靶向性的表皮生长因子受体（EGFR）阻滞剂、针对某些特定细胞标志物的单克隆抗体、针对某些癌基因和癌的细胞遗传学标志的药物、抗肿瘤血管生成的药物、抗肿瘤疫苗和基因治疗等等，并在不到10年内有了长足的发展。目前研究的一个热点领域是与肿瘤生长、迁移密切相关的各种生长因子的受体区域及细胞内的酪氨酸激酶区域。
贺浪冲教授利用血管内皮细胞（ECV304）膜色谱模型，对陕西秦巴山区特有的中药材红毛七进行筛选分析，发现了与ECV304上膜受体具有特异性结合作用的活性成分，通过系统的分离纯化和结构分析确定其为塔斯品碱。以VEGFR为靶进行了系统衍生物的合成和构效关系研究，为开发更有效的成肿瘤血管生成抑制剂奠定基础。塔斯品碱的结构优化研究发现了一系列含水杨醛肟的新型VEGFR-2抑制剂，在抗血管生成作用机制研究中发现化合物B10对EphB4和TIE-2也有选择性抑制，可作为多靶标抑制剂研究的新型先导物。本课题就是在此基础上开展的深入研究，是为发现基于VEGFR-2/EphB4/TIE-2多靶标的抗血管生成候选化合物而提出的。B10就是在以上工作的基础上设计、合成的针对多种生长因子受体及其酪氨酸激酶的多靶点抗肿瘤药物。
2． 作用机制
作用于肿瘤血管增生相关的生长因子受体的激酶和受体，阻断激酶的磷酸化作用，从而阻止新生血管的形成。其抗肿瘤作用机制可能作用在以下途径：抑制肿瘤细胞的增殖，诱导细胞凋亡，抗新生血管形成，阻断肿瘤细胞营养物质的供给等。在基于VEGFR-2为靶标的Taspine结构优化研究中，确证了联苯作为VEGFR-2抑制剂结构母核的有效性。进一步研究证实含水杨醛肟的联苯衍生物具有较好的VEGFR-2抑制活性，最终发现了1个抗血管生成的候选药物B10。B10具有与Sorafenib （IC50=1。06 nM）接近的VEGFR-2抑制活性（IC50=4。20 nM），分子模建结果显示水杨醛肟可与Hinge区形成关键的氢键作用。进一步利用自主构建的高表达VEGFR-2的HEK293/CMC模型，筛选发现B10与VEGFR-2有较高亲合力，这与酶活筛选结果相一致。
为了阐明B10的作用机制，我们深入筛选了其对血管生成相关受体的抑制活性。发现B10对促血管生成相关的EphB4 （IC50 = 84。52 nM）和TIE-2 （IC50 = 179。08 nM）有选择性抑制，而对其他RTKs的抑制活性较差（IC50>1 μM）。B10与DFG-out构象受体的结合模式显示：B10与三个靶标的结合模式与经典的Type II型抑制剂相一致。基于以上研究结果，我们认为B10可作为Type II型VEGFR-2/EphB4/TIE-2多靶标抑制剂研究的新型抗肿瘤候选药物。
3． 药理活性
能够选择性地靶向针对多种受体酪氨酸激酶的新化学实体（NME）。它通过阻断肿瘤生长所需的血液和营养物质供给的作用机制产生抗肿瘤作用。细胞水平药理活性筛选发现B10对多种肿瘤细胞株均具有较好的增殖抑制活性。特别是对人肝癌细胞7721的抑制活性高于阳性对照吉非替尼，B10对人脐静脉内皮细胞（ECV304）也具有较强的抑制作用。
为了进一步研究B10的抗肿瘤作用及其机制，我们进行了B10在小鼠体内抗肿瘤活性实验。结果显示B10对于构建的肝癌小鼠体内的肿瘤实体具有明显的抑制作用，抑瘤率达到了41。46%～52。20%，并且抑瘤效果表现为非剂量依赖。综上所述，B10在体内外均具有显著地抗肿瘤作用。其抗肿瘤作用的更深入的机制有待于进一步的研究。
4． 研究目标
① 对B10进行创新药物的开发研究，按照中国SFDA对一类抗癌新药的技术要求进行有关的药理、毒理、药效、药代动力学、质量标准、稳定性等药物制剂研究，申报临床批件。
② 提供项目研究的原始资料并按照现行化学药1类新药申报资料项目要求，协助整理B10申报资料。
5．项目成熟度
已获得化合物及制备方法专利，目前实验室已完成初步活性筛选及作用机制研究。