[01842863]中药有效成分分离制备新技术及其应用研究

在国家自然基金项目、“十五”国家重大科技专项“创新药物和中药现代化”863项目和上海市科委生物医药项目的资助下，针对中药复杂体系有效成分分离制备的瓶颈问题，创造性地提出并建立了中药有效成分分离制备的集成化新技术，为创新药物研究与中药现代化研究提供了候选化合物、标准对照品和行之有效的中药单体分离制备技术平台。目前已经成功建立了6类10多个中药单体分离制备工艺方法，获得国家发明专利8项、公告2项，发表SCI收载论文42篇，发表SCIE收载论文2篇。 （1）基于串联质谱技术，首次提出并建立了中药有效成分分离纯化、指纹鉴定—分析柱/制备柱线性放大-LC-MS/MS快速分析一体化研究的高效中药质量控制方法体系，成功地应用于具有心血管药理活性的莲子心双苄基异喹啉类生物碱的质量研究，相关成果发表在国际药物与生物医药分析权威杂志（J Pharm Biomed Anal，2007，43：99～104）。 J Pharm Biomed Anal杂志审稿人的评价认为，这是一项非常好的工作，论文从实验设计、实施方案到分析方法学验证都非常严谨，对于中药定性定量研究具有很好的指导意义，可以作为中药复杂体系分离的指导性原则与方法。 Su Zeng等在发表的论文（Rapid Commun Mass Spectrom，2007,21：2120～2128.）中充分肯定了我们的研究成果（J Pharm Biomed Anal，2007,43：99～104），认为对于莲子心中三种主要生物碱的定性鉴识、分离制备的方法体系是一种快速测定植物粗提物中生物碱的有效分离分析体系；并用我们莲子心三种酚性生物碱质谱裂解规律的研究结果，进一步支持他们甲基莲心碱体外肝微粒体温孵实验代谢过程的讨论。 （2）针对国际上常用制备液相色谱技术分离周期长、产品得率低等不足，首次提出并深入研究了新型的等度洗脱二维反相高效液相色谱循环制备方法，通过六通双向切换阀装置巧妙地构建了双柱分离与连续进样的高效率色谱分离模式，辛夷五种木脂素成分、栀子六种环烯醚萜苷以及射干五种异黄酮分离制备的研究成果已相继发表在国际分离科学与生物色谱学权威杂志（J Sep Sci，2007，30：2370～2381；J Chromatogr B，2007，858：296～301和Biomed Chromatogr，2009，23：1064～1072）。 J Chromatogr B杂志的审稿评述认为，论文（J Chromatogr B，2007，858：296～301）的研究方法与通常的制备技术相比工艺简便，是令人感兴趣的环烯醚萜苷制备方法，尤其是二维柱切换系统的搭建与改装，为生物医药领域的相关人员提供了很有价值的研究思路。 S.P.Li等在三七多组分的多柱HPLC分析的研究论文（J Pharm Biomed Anal，2008,48：1361～1367）中支持了我们二维柱切换系统研究与应用的新颖性（J Chromatogr B，2007,858：296～301），认为采用柱切换方式结合多柱分离技术，可以实现不同极性组分在不同色谱柱上的分离，是解决中药复杂体系分析的有力手段。 （3）在研究、比较HSCCC国内外实验方法的基础上，首次提出传统分配系数静态测定—分析型HSCCC动态验证—制备型HSCCC微调放大“三部曲”的最佳溶剂体系快速筛选方法，大样本量栀子苷分离制备的应用成果发表在国际色谱学顶级杂志（J Chromatogr A，2005，1100：76～80.）。为了实现HSCCC分离制备产品快速纯度检查，通过六通切换阀及分流装置进一步创造性地搭建了HSCCC-HPLC-DAD相结合的HSCCC分离制备在线纯度检测系统，并将其成功地用于中药贯叶连翘、知母有效成分的分离制备（J Chromatogr A，2006，1116：97～101和J Pharm Biomed Anal，2007，44：96～100）。 我们的HSCCC研究成果获得了国际学术界的广泛认同。11篇论文发表在国际色谱学顶级杂志J Chromatogr A，其中研究成果之一（J Chromatogr A，2005，1092：216～221）被他人引用达26次。Ian A.Sutherland等关于HSCCC技术在中药现代化中地位的综述（J Chromatogr A，2009,1216：740～753）中大量引用了我们的研究工作，选择14篇论文从不同角度以说明HSCCC方法学研究、两相溶剂系统选择优化及流动相流速梯度选择等的科学意义。Yi-zeng Liang等关于中药与分离科学的综述（J Sep Sci，2008,31：2113～2137）中总结了HSCCC在中药分离制备中的应用价值，引用我们7篇研究论文以说明HSCCC在黄酮类、环烯醚萜苷类和木脂素类等天然产物有效成分分离制备中的优势。Sticher在Natural Product Reports（影响因子7.450）中发表了题为“Natural product isolation”（Natural Product Reports,2008,25：517～554）的综述，多方面引用了我们16篇有关中药分离制备方面的研究论文，其中关于HSCCC在线检测的论述中大篇幅介绍了我们创新性成果（J Chromatogr A，2006，1116：97～101和J Pharm Biomed Anal，2007，44：96～100），并高度评价了我们搭建的HSCCC-HPLC-DAD在线纯度检测系统：该系统能够在收集样品时只选择性地收集符合纯度要求的目标组分，成功地对贯叶连翘中的金丝桃苷和知母中的新芒果苷、芒果苷进行了分离制备。