技术详细介绍
一、发明创造简介
耐热菌检测是控制苹果浓缩汁质量安全的必备技术，目前通用方法是传统的细菌平皿培养记数法，检测周期长（4-5d），检测结果不能及时有效的反馈生产线以控制产品质量，普通PCR法检测耐热菌可以达到快速，但只能定性，不能定量，QC-PCR（竞争定量PCR）可实现定量，但需制备被检测菌的特制竞争模板。本发明公开了一种耐热菌QC-PCR快速定量检测所用竞争模板的制备方法，其技术路线是：提取耐热菌DNA作为目标模板，用本方法设计的引物1、引物3经一般PCR扩增，凝胶电泳检测，再用DNA凝胶分离纯化试剂盒分离纯化回收竞争模板，即可制备得到除比目标模板（298bp）中间少51bp外，其它部分相同的耐热菌QC-PCR所用竞争模板（247bp）。本发明所制备的竞争模板经与目标模板共扩增，当竞争模板与目标模板浓度相近时，二者具有相近的扩增效率，且两者扩增产物能够在凝胶电泳上清楚的分开，可成功的用于QC-PCR对耐热菌的快速定量检测。
二、创新点
1．成功设计出构建QC-PCR检测耐热菌所用的竞争模板扩增引物。
2．制备出了QC-PCR定量检测耐热菌所用的竞争模板。
三、发明的应用价值和市场前景
本发明主要应用于浓缩苹果汁中耐热菌的QC-PCR快速定量检测，也适用于其他果汁或其他食品中耐热菌的快速检测。仅果汁厂，我国目前就有近100家，年生产苹果浓缩汁50多万吨，耐热菌常常超标，为果汁厂必检项目。本发明为QC-PCR快速定量检测耐热菌提供了专用竞争模板，能在4-5h内实现耐热菌的快速定量检测，检测结果可及时反馈生产线，以有效控制果汁质量安全，具有很高的应用价值和市场前景。