[01440284]丹蒌方干预冠心病痰瘀互结证的网络调控机制研究

1.课题来源与背景：国家重点基础研究发展计划（973计划）课题——冠心病痰瘀互结证病证关系及其生物学基础研究（课题编号：2014CB542902）和国家自然科学基金青年项目——基于NF-κB信号转导通路探讨丹蒌方治疗冠心病痰瘀互结证的机制研究（课题编号：81403198）。 2.技术原理及性能指标：（1）技术原理：1)采用高脂饲料喂养联合冠状动脉左前降支结扎和高脂饲料喂养联合异丙肾上腺素药物诱导建立冠心病痰瘀互结证大鼠、ApoE基因敲除小鼠模型,通过冠状动脉左前降支结扎手术或异丙肾上腺素药物诱导,导致实验动物心脏缺血,以模拟冠心病心肌缺血中医学“瘀”的病理特征,通过高脂饲料喂养模拟冠心病动脉粥样硬化中医学“痰”的病理特征,两者联合造模模拟冠心病痰瘀互结证的临床表现。2)模型建立后,通过一般状态、心脏超声情况、血脂、血管内皮因子、病理改变、PI3K/AKT信号通路、PPARγ信号通路和NF-κB信号通路等多角度探讨冠心病痰瘀互结证的发病机制。同时开展了丹蒌方干预冠心病痰瘀互结证动物模型的作用机制研究,并且对课题组前期开展的冠心病痰瘀互结证临床生化、表达谱芯片和蛋白组学研究中与免疫、炎症、氧化应激反应密切相关的有意义的阳性指标进行了实验验证。3)采用ox-LDL诱导单核/巨噬细胞株泡沫化模型用于模拟冠心病痰瘀互结证的发病过程,为进一步揭示冠心病痰瘀互结证发生的分子机制及丹蒌方治疗“痰瘀互结证”的临床应用提供了细胞模型,也为丹蒌方治疗冠心病痰瘀互结证提供科学依据。（2）性能指标：本研究首次系统规范建立了冠心病痰瘀互结证大鼠模型、ApoE基因敲除小鼠模型和ox-LDL诱导单核/巨噬细胞株泡沫化模型,在动物和细胞模型的建立与评价基础上,揭示了丹蒌方治疗冠心病痰瘀互结证的作用机制。撰写结题报告,第一作者或通讯作者公开发表SCI论文6篇,在国内核心期刊发表论文13篇,培养博硕士研究生7名,申请专利2项。 3. 技术的创造性与先进性：（1）本研究首次系统规范建立了冠心病痰瘀互结证大鼠模型和ApoE基因敲除小鼠模型,分别从PI3K/AKT信号通路、PPARγ信号通路和NF-κB信号通路等探讨了冠心病痰瘀互结证动物模型的建立与评价方法。（2）在冠心病痰瘀互结证动物模型系统评价的基础上,开展了丹蒌方干预冠心病痰瘀互结证动物模型的机制研究,并且对课题组前期开展冠心病痰瘀互结证临床生化、表达谱芯片和蛋白组学研究中与免疫、炎症、氧化应激反应密切相关的有意义的阳性指标进行了实验验证,研究发现丹蒌方干预冠心病痰瘀互结证动物模型在生化水平、基因水平、蛋白水平等方面与临床患者生化指标、基因组学、蛋白组学研究中的差异性指标表达出现了一致性的变化,从而验证了冠心病痰瘀互结证大鼠模型和ApoE基因敲除小鼠模型的成功建立。（3）建立了ox-LDL诱导单核/巨噬细胞株泡沫化模型用于模拟冠心病痰瘀互结证的发病过程,为进一步揭示冠心病痰瘀互结证发生的分子机制及丹蒌方治疗“痰瘀互结证”的临床应用提供了科学依据。 4. 技术的成熟程度,适用范围和安全性：本研究采用高脂饲料喂养联合冠状动脉左前降支结扎术、高脂饲料喂养联合异丙肾上腺素诱导分别建立了冠心病痰瘀互结证大鼠模型和ApoE基因敲除小鼠模型,并建立了ox-LDL诱导RAW 264.7细胞成泡沫细胞模型。对课题组前期冠心病痰瘀互结证临床研究中与免疫、炎症、氧化应激反应密切相关的有意义的阳性指标进行了验证,探讨了丹蒌方治疗冠心病痰瘀互结证的作用机制。本研究取得的成果在天津现代创新中药科技有限公司、天津中医药大学第一附属医院、天津中医药大学第二附属医院、中国抗癌协会肿瘤传统医学专业委员会等11家临床、科研、教学单位应用后得到良好的反馈。本研究取得的成果适用于中医、中药、中西医结合等领域进行冠心病痰瘀互结证基础研究;适用于中药企业进行中药新药研发、中药二次开发等,为新药的临床应用提供科学依据,促进中药产业创新发展,产生较高的经济和社会效益;同时,可供制定中医药领域相关政策的临床、教学、科研人员及广大博硕士研究生使用,也可用于中医药高等院校的教学科研工作。 5. 应用情况及存在的问题：本研究取得的成果在天津现代创新中药科技有限公司、天津市石天药业有限责任公司、中国抗癌协会肿瘤传统医学专业委员会、天津中医药大学第一附属医院、天津中医药大学第一附属医院药物临床试验机构、天津中医药大学第一附属医院制剂室、天津中医药大学第二附属医院、天津中医药大学第二附属医院国家药物临床试验机构、天津市武清区中医医院、天津中草药杂志社、天津中医药编辑部11家单位进行了推广应用,得到良好的反馈,具有较强的理论和实用价值,但该成果仍需进一步推广应用。