[01400365]蜗牛酶制备桔梗皂苷D及其肝保护作用研究

一、课题来源与背景 2012年1月,受吉林省科学技术厅委托,吉林农业大学中药材学院承担了吉林省科技发展计划项目《蜗牛酶制备桔梗皂苷D及其肝保护作用研究》（编号：201201102）的研究工作,并于2014年12月全部完成项目的研究内容。 桔梗（Platycodi Radix）为我国传统的大宗药材之一,且食药同源。桔梗具有多种药理活性,其主要活性物质基础为桔梗皂苷类成分。桔梗皂苷母核新颖,活性多样,利用碱水解可以得到桔梗总次皂苷,且转化型桔梗皂苷（桔梗次皂苷）的抗IBDV、AIV和NDV活性更高。同时运用酶法修饰后的桔梗总皂苷和桔梗皂苷D显示了更强的细胞毒活性,提示桔梗次皂苷可能具有更强生物活性,然而这些报道并没有从桔梗次级苷单体上进行活性实验跟踪来进一步阐释实为缺憾。 化学性肝损伤是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。CCl4诱导的动物模型一直是肝保护药物研究的经典模型。桔梗皂苷D作为桔梗中的主要活性成分,具有明显的抗氧化作用,但对其肝保护活性尚未见报道,因为本研究着眼于桔梗皂苷D的制备及其保肝作用具有重大的理论和实际意义。 二、研究目的与意义 本研究运用传统植物化学手段提取分离桔梗总皂苷,鉴于桔梗皂苷的糖基结构特点,应用蜗牛酶转化已有皂苷成分（桔梗皂苷E等）制备桔梗皂苷D;在整体动物水平,研究桔梗皂苷D对CCl4诱导的肝纤维化小鼠的肝损伤保护作用,为进一步开发桔梗皂苷D的保肝应用提供理论参考。 三、主要论点与论据 1、以桔梗饮片为原料,优选高压脉冲提取（PEF）,获得富含桔梗总皂苷的粗提取物,进而利用大孔树脂柱色谱进行富集桔梗总皂苷。重量法测定,桔梗总皂苷获取率为4.98%,提取率为27.8%。利用UV法测定,以桔梗皂苷D为对照品,PEF获得的总皂苷含量为77.3%。 2、利用蜗牛酶水解桔梗总皂苷,从而将结构相近的桔梗皂苷E,桔梗皂苷D3等转化制备为桔梗皂苷D,利用HPLC法测定,桔梗皂苷D产率为62%。 3、通过建立CCl4诱导的急性肝损伤模型,观察桔梗皂苷D的体内肝保护活性,结果表明：桔梗皂苷D的对降低ALT和AST的总有效率达到100% 4、建立了急性酒精肝损伤小鼠模型,进一步评价桔梗皂苷D的肝保护活性。 四、项目创新点 1、首次以桔梗总皂苷为底物,利用蜗牛酶转化制备活性成分--桔梗皂苷D,为今后工业化生产桔梗皂苷类成分提供了理论参考。 2、发掘传统中药--桔梗肝保护活性的潜力。突破了桔梗传统的镇咳祛痰用法,为桔梗的更广泛应用提供了科学的依据,也为桔梗在肝保护治疗剂的开发提供了新资源。 五、社会经济效益,存在的问题 1、社会经济效益 （1）通过探索桔梗总皂苷、桔梗皂苷D提取及纯化工艺,及明确桔梗皂苷D的保肝作用,为桔梗资源的开发提供了依据。 （2）通过研究,发表学术论文2篇,其中SCI收录论文1篇;申请发明专利1项,形成自主知识产权。 因此,本研究结果具有理论和实践价值 2、存在问题 （1）桔梗皂苷D对肝损伤保护作用的分子机制还需进一步深入完善研究 （2）应加强对桔梗肝保护活性的后续产品开发。