[01342308]利用转基因植物生物反应器生产重组阿朴脂蛋白（Apolipoprotein AI Milano）的研究

本研究为河北省教育厅自然科学研究指令计划资助项目之一,编号为2008432。心血管疾病是全球范围导致人类死亡最主要的原因,诸多的心血管疾病（如心肌梗塞和中风）为动脉粥样硬化的主要合并症。研究证明阿朴脂蛋白A-I米兰突变体是世界上唯一能够清除已经沉积在动脉壁上血栓的药用蛋白,具有十分广阔的应用前景。本研究项目是开发高效表达阿朴脂蛋白A-I米兰突变体的植物生物反应器,选用了油葵构建生物反应器。首先分离克隆了油菜油体蛋白基因启动子和花生油体蛋白基因,并按照植物偏爱的密码子设计合成阿朴脂蛋白A-I米兰突变体基因。在此基础上构建了以油菜油体蛋白启动子驱动的花生油体蛋白与阿朴脂蛋白A-I米兰突变体的融合蛋白基因植物表达载体。其次将携带阿朴脂蛋白A-I米兰突变体基因的植物表达载体导入农杆菌,进行由农杆菌介导的基因转化。第三 转基因后获得的植株经抗性筛选,得到抗性植株,然后经PCR、Southern blotting获得了转基因植株。第四,转基因植物的种子经粉碎→液体抽提→离心处理→回收上层油相,再将油体蛋白和apoA-IM突变体融合蛋白从油体表面释放出来,进行了Western blotting 鉴定。