[01332894]猪主要病原病毒特异性单克隆抗体研究

一、任务来源该项目“猪主要病原病毒特异性单克隆抗体研究”（合同编号20030552-1）为吉林省应用基础研究项目。二、应用领域和技术原理1、应用领域：畜禽养殖和动物疫病防控。2、技术原理：体外淋巴细胞杂交瘤技术、细胞融合技术、胶体金标记免疫层析技术。三、性能指标（1）计划指标①分别获得猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、呼吸及繁殖障碍综合征病毒各两株以上特异性、高效价单抗杂交瘤细胞系。②制备出三种病毒的特异单克隆抗体，并鉴定其特性。③尝试应用金标记单抗快速检测三种病原病毒的可行性。（2）项目完成指标及科研成果①获得了抗猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、呼吸及繁殖障碍综合征病毒的单抗杂交瘤细胞株，其细胞融合率分别为97.26%、92.3%和90%。通过有限稀释法进行3次亚克隆，最终获得4株猪瘟病毒单抗杂交瘤细胞系，2株伪狂犬病病毒单抗杂交瘤细胞系，2株呼吸及繁殖障碍综合征病毒单抗杂交瘤细胞系。②研制出了猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、呼吸及繁殖障碍综合征病毒的特异性单克隆抗体。其中，各种病毒最高单克隆抗体腹水效价和细胞培养上清效价分别为1∶102400和1：1024；1：409600和1：4096；1：20480和1：256。③研制出了猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒的单抗胶体金试纸条，用于快速检测相应病原。其中，猪伪狂犬病单抗胶体金试纸条的敏感性较高，为5×10^(-3)；猪瘟单抗胶体金试纸条的敏感性次之，为10^(-2)。④建立了一种针对猪呼吸及繁殖障碍综合征病毒进行检测的银加强金标免疫技术。该技术对PRRSV纯病毒的最小检出量为0.703ng/点，克服了胶体金试纸条检测敏感度低的缺点。四、国内外同类研究成果比较项目所涉及的主要技术包括体外淋巴细胞杂交瘤技术和胶体金标记免疫层析技术。前者是一项传统技术，被广泛应用多种病原单抗的制备过程中。尽管国内外有关猪瘟、猪伪狂犬、猪呼吸与繁殖障碍综合征等病毒单克隆抗体的研究报道较多，但与之相比，该项目的研究内容与侧重点有所不同，我们侧重于全病毒单抗的制备；而后者作为新兴标记技术则方兴未艾，特别是一些改良技术，如该项目所采用的银加强胶体免疫技术至今尚未得到广泛应用，仅见于鸡传染病性支气管炎的研究中。而将其应用于猪呼吸与繁殖障碍综合征等病毒研究之中，在国内尚属首次。因此，该项目将传统的实验技术（体外淋巴细胞杂交瘤技术）与现代生物新技术（胶体金标记免疫层析技术）相结合，互为补充和利用，对猪瘟、猪伪狂犬、猪呼吸与繁殖障碍综合征等病毒单克隆抗体制备及鉴定等问题，研究得更加深入、全面、细致；而对于胶体金标记单抗进行病原检测等问题，则研究得详实、先进、科学。五、成果的创造性、先进性1、将银加强胶体免疫技术引入猪呼吸与繁殖障碍综合征等病毒研究之中，建立了敏感特异的病原检测方法；2、研制出了猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒的单抗胶体金试纸条，用于快速检测相应病原。试纸条检测技术先进，手法简便。3、获得的伪狂犬病病毒特异性单克隆抗体的腹水效价和细胞培养上清液效价较高。六、作用意义（直接经济效益和社会意义）通过研究，虽然该项目研制的猪主要病原病毒特异性单克隆抗体未在实际中广泛应用，尚处于科研中试时期和申请国家批准文号阶段，但研究成果却显现出了良好的应用前景和开发潜力。因为作为一种有效的诊断试剂产品，该项目所获得的HCV、PRV和PRRSV特异性单克隆抗体现已完全具备科技成果转化能力。若能与生产企业联合，一道开发诊断试剂品，即可免除产品研发成本和研制时间，有利于企业抢占市场先机，收获巨大经济效益。同时，该项目研究成果又可以为省内兽医行政部门提供HCV、PRV和PRRSV的参考诊断方法，协助做好动物疫病防控工作，这对于增强基层兽医工作能力，提高临床诊断水平，将会大有裨益。七、推广应用的范围、条件和前景以及存在的问题和改进意见1、应用范围与条件：项目所获成果可在吉林省各市、县、乡、村的养猪场中进行推广和使用，也可在吉林省各兽医行政部门中推广。但涉及有关单克隆抗体操作和制备的具体技术等情况则须保密，在没有得到知识产权保护前提下，只能作为内部研究之用。2、应用前景：该项目研究内容是根据吉林省动物疫病发生实际情况而确立了，有针对性，并且研究成果现已具备科技成果转化能力，显现出良好应用前景和开发潜力。3、存在问题与改进意见：由于技术原因，加之时间有限，项目所得到的4株猪瘟病毒单抗杂交瘤细胞系，2株伪狂犬病病毒单抗杂交瘤细胞系，2株呼吸及繁殖障碍综合征病毒单抗杂交瘤细胞系尚需进一步验证其稳定性，而所获得的特异性单克隆抗体也需监测其质量和纯度。