[01313723]湖南猪源粪肠球菌耐药情况调查及耐药机理分析

课题来源于湖南省科技计划应用基础项目; 课题研究背景：肠球菌是革兰氏阳性球菌,为条件致病菌,可引起菌血症、心内膜炎、泌尿系感染、腹腔感染、伤口感染等严重感染,其中95%由粪肠球菌引起。肠球菌对现有的大多数抗菌药物天然耐药,如青霉素类、头孢类抗菌药物,使其不易从感染部位清除,此外,肠球菌还可通过基因突变、质粒转移或转座子等方式获得耐药性,调查肠球菌的耐药性具有重要的公共卫生意义。 技术原理： 本研究通过对粪肠球菌全基因组中可移动性基因片段进行分析,发现在其基因组中,三分之一的基因片段是可移动性片段,对这些可移动性片段分析,找出了已被证明的CRISPR位点。通过设计特异性引物,PCR扩增该区域,对临床分离粪肠球菌CRISPR位点进行存在情况调查;另一方面,通过药敏实验及耐药基因检测,分析临床分离株粪肠球菌中由可移动性元件介导的耐药性进行分析;然后通过统计学分析,找出CRISPR与可移动性元件介导的耐药性之间是否存在分子生物学显著意义。 性能指标： 1、检测了自临床病例猪体内分离的42株粪肠球菌的毒力基因、耐药性及耐药基因; 2、用种特异PCR方法检测了湖南42株粪肠球菌的CRISPR位点,揭示了其特异性结构; 3. 探索了粪肠球菌CRISPR/Cas系统在大肠杆菌中的功能; ③技术的创造性与先进性：以期发现可移动性元件介导的耐药性的传播是否受到CRISPR位点的调控,为今后对于耐药机制的研究提供指导性的方向,同时填补国内尚缺乏的对CRISPR位点的研究空白。 ④技术的成熟程度,适用范围和安全性; 本课题涉及到的技术如PCR技术等都是成熟的技术,本课题应用分子生物学软件设计了检测粪肠球菌的CRISPR位点的PCR引物,建立了PCR方法,该方法只能用于检测肠球菌的CRISPR位点,不能用于其他细菌的检测,课题涉及到的检测方法都是可靠的。 ⑤应用情况及存在的问题; 该课题属于应用基础课题,尚不能应用生产实际中。 ⑥历年获奖情况;没有获奖