[01290982]冰冻组织芯片的研制及应用

1、国内外研究现状：　　组织芯片，又称组织微阵列（tissue microarray，TMA），由Kononen[1]于1998年创立，是将数十个至上千个小组织整齐地排列在一张载玻片上而制成的组织切片，可作为一种高通量、大样本的研究工具进行各种研究，如免疫组化、原位杂交、FISH等。组织芯片包括石蜡组织芯片和冰冻组织芯片，目前国内外研究及应用最多的是石蜡组织芯片，具有组织用量少，信息量大，实验条件均一，减少试剂消耗等优点。组织芯片制作器具虽已商品化，但价格昂贵。而且，石蜡组织芯片有其局限性，不能同时检测DNA、mRNA和蛋白质，同时在芯片制作过程中还存在DNA、mRNA的丢失和蛋白质抗原形成交联等问题。　　冰冻组织芯片不但可以克服上述的缺陷，还可以与激光捕获显微切割技术（Laser capture Microdissection，LCM）相结合以克服肿瘤的异质性问题，使DNA和RNA的丰度更高，使检测结果更加有价值。但是国内外尚无完备的冰冻组织芯片制作技术，为了解决现有技术中存在的问题，我们自行研制了《冰冻芯片模具》（专利号：ZL200520025689.X），应用该芯片模具和冰冻组织进行冰冻组织芯片的制作及可行性探讨，为简单、经济、规范地进行蛋白及基因原位分析提供一种新方法。　　2、主要技术路线　　我们应用冰冻芯片模具和收集的冰冻组织进行了冰冻组织芯片的制作。应用模具打出的点阵，点与点之间的距离均匀统一，而且操作简便，技术可靠，费用低廉，经济实用；制作出的冰冻组织芯片，适用于对DNA、mRNA及蛋白质进行原位检测，具有广阔的应用前景和实用价值。我们在实验中，收集新鲜肺原发癌手术标本19例，癌旁正常肺组织5例，已经成功的应用此技术研制了48点阵的冰冻组织芯片，并进行HE染色、免疫组化染色，对其在形态学及基因表达分析方面的可行性进行评价。结果表明冰冻组织芯片排列整齐，HE切片细胞的形态结构基本清楚，免疫组化组织形态基本完好，与普通冰冻切片免疫组化结果有较高符合率。　　我们制作的冰冻组织芯片方法不仅成功的解决了石蜡组织芯片中DNA、mRNA的丢失和蛋白质抗原形成交联等问题；而且在完全相同的实验条件下，能够比石蜡组织芯片更高效而准确地原位分析大量新鲜标本的组织学和细胞/分子遗传学特点，可用于组织化学染色、免疫组织化学染色等，从而大大提高研究的科学性和可信性，在肿瘤相关基因表达及其功能的分析中有着十分广泛的应用前景和实用价值。　　3、本课题创新点　　我们应用自制的冰冻芯片模具（已申请专利，专利号：ZL200520025689.X）制成的冰冻组织芯片，为国内首创，成功的解决了石蜡组织芯片中DNA、mRNA的丢失和蛋白质抗原形成交联等问题，更高效而准确地原位分析大量新鲜标本的组织学和细胞/分子遗传学特点，从而大大提高研究的科学性和可信性。该方法操作简单，技术可靠，且费用低廉，经济实用，有较好的社会效益和经济效益。　　4、本研究的不足之处和努力方向　　（1）进一步熟练掌握该技术，努力制成高质量冰冻芯片；　　（2）今后将该技术进一步推广，广泛应用到科学研究和临床病理快速诊断。　　5、项目产出　　（1）申请专利一项：冰冻组织芯片模具，专利号ZL200520025689.X。 　　（2）发表1篇论著。郑海燕，王新允，王爱香等，冰冻组织芯片的研制及可行性探讨[J].中国肺癌杂志，2008，11(3):373-376。　　（3）待发表文章：郑海燕，王新允.非小细胞肺癌在冰冻组织芯片中的表达及意义.中国肺癌杂志(待发表)。