[01282793]人腺病毒展示登革热病毒中和抗原表位多价疫苗候选株构建

通过本课题实施,进一步确认了登革病毒4个不同血清型的中和抗原表位,有助于对登革病毒的深入认识和相关疫苗研究工作。本研究在3型腺病毒六邻体不同HVR分别插入登革病毒不同血清型的中和抗原表位,研制一种以人3 型腺病毒表面展示登革病毒中和抗原表位、避免产生ADE效应为特点的多价登革病毒疫苗,为登革病毒疫苗的研制和应用、以及研制一种新的”腺病毒-抗原表位展示重组载体系统“的应用奠定科学依据。 登革病毒广泛流行于热带和亚热带地区,是分布广、发病多、危害大的虫媒病毒,我国华南地区是登革热病毒至今仍未有针对各个血清型登革病毒安全有效的疫苗。本研究以3型腺病毒作为新型六邻体展示外源蛋白平台技术为载体,在腺病毒不同HVR插入不同血清型的登革病毒中和抗原表位,为研究登革病毒多价疫苗奠定了基础。 本研究利用3 型腺病毒展示技术,探讨登革病毒表位重组多价疫苗的可行性。本研究验证了3 型腺病毒可作为载体应用于多价疫苗的研发,具有较好的应用前景,所获登革病毒抗原表位腺病毒载体重组病毒可应用于后续相关研究及诊断试剂原料中（如分子诊断阳性对照、免疫实验抗原对照材料、单抗筛查工具等）。 参与本课题的老师和学生对课题具有较好的促进作用,并对1名硕士生、2年轻技术人员直接得到了实验技能培养和煅练,本项目在研究期间,课题组两名核心成员获得高一级技术资格。 本研究为应用基础研究,还有待进一步的转化才能形成可推广成果,一旦成功转化为人3型腺病毒疫苗、基因工程疫苗、腺病毒多价疫苗、新型肿瘤治疗载体及腺病毒六邻体外源蛋白展示平台,将具有巨大的经济效益。 本研究根据提出了以人3 型腺病毒六邻体抗原表位置换为基础的抗原表位展示系统。腺病毒在真核细胞内表达,可以最大限度的保持插入抗原表位的翻译后加工和修饰,并且腺病毒六邻体抗原表位数量多,插入抗原表位可以随其一起表达,并组装到腺病毒表面,这在数量和质量上都有可能保证所插入的外源抗原表位的抗原特性,故本展示载体系统的进一步完善将可推广应用于其它抗原特性研究、疫苗研制等工作中。 六邻体是腺病毒衣壳中含量最高的蛋白,也被认为是中和抗体的主要靶点。近年来,在克服预存免疫的策略中,很多都是针对六邻体进行设计的。在六邻体蛋白三聚体结构的塔尖区域中有7个HVR,包含型特异性表位。针对此,设计了一种新型的5型腺病毒嵌合型载体,其中位于5型腺病毒六邻体的7个HVR被相应的来自罕见血清型腺病毒Ad48的HVR代替,这种病毒能稳定传代。在动物实验中,该病毒在高水平5型腺病毒预存免疫存在时保持外源抗原的免疫原性。该实验证明构建六邻体HVR区嵌合体腺病毒载体是克服预存免疫的有效方法。 在登革病毒防控疫苗方面一直为国际研究热点之一,GSK公司多价疫苗已在南美洲开展II临床实验研究,印度一研究小组发表研究论文提示多中和抗原表位联合体在5型腺病毒载体中成功获得表位并有较好的中和效应,同样提示多个型别的登革病毒中和抗原表位联和表达作为克服ADE效应的登革病毒疫苗的可行性。 在本课题的实施期中,2014年5月-11月间,在华南地区爆发了以1型为主、1-2型混合、重症多见的登革热疫情,已吸引了多个研究小组的注意力、正在掀起了一个新登革热研究高潮,相信未来几个国内在登革病毒及其相关疾病的研究方面会占有一定的国际地位。下一步的工作设想：研究建立更规范、敏感的登革病毒分离培养技术;争取更高层次的课题立项和经费支持,进一步改进和评价腺病毒载体多价登革病毒中和抗原表位重组体疫苗技术的可转化应用研究,为登革病毒的防控和健康事业做出贡献。