[01275288]具有优异抗逆特性的多枝赖草可转化人工染色体(TAC)文库构建与筛选利用
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技术详细介绍
利用2 种TAC 载体构建了多枝赖草基因组可转化人工染色体文库，共包含约40 万个克隆，其中DNA 片段插入载体pYLTAC17 和pYLTAC747H 的克隆分别约16 和24 万个。
依据所选择的插入DNA片段范围从5KB 到200KB 或以上，估计覆盖3-6 倍多枝赖草基因组大小；它们以混合克隆形式被冷冻保存在12X2 块深孔96 孔细菌保存板中，每孔约含300-600 个克隆；然后被手工分装到3 块384 孔板中，并在空白孔内添加包含叶绿体和线粒体DNA 探针的菌液以备后续文库鉴定所用；用GeneTAC G3 的Gridding 程序，自动点制混合克隆菌斑杂交膜2 份。
此外，还挑取了5391 个单克隆，其中DNA 片段插入载体pYLTAC17 和pYLTAC747H 的克隆分别为2501 和2890 个，被冷冻保存在14 块384 孔板中并用GeneTAC G3 的Replication 程序自动复制1 份；还自动点制单克隆菌斑杂交膜2 份。
从已经获得的各种与耐黄矮病、耐蚜虫、耐旱、耐盐碱基因相关的分子标记进行了探针制备的前期准备程序。
一旦筛选到抗逆阳性克隆，就可直接转化，快速服务育种生产也便于优异基因分离与基因组学等方面的基础研究。