[01266310]DNA指纹技术的研究及应用

作为自选课题，课题组建立改良RAPD技术和STR技术对中药赶黄草的分子鉴定和系统发育、中药天麻的指纹分析、中药紫花地丁和东北堇菜的分子鉴定、泸州桂圆和荔枝基因多态性分析与鉴定、蜘蛛的系统分类和人类DNA指纹鉴定及其应用等，具体如下：

1、RAPD它依赖于PCR，RAPD技术较低的退火条件（36℃）会明显影响PCR扩增条带的稳定性和重复性，进而影响到分析结果的可靠性，有分辨率低、重复性差和扩增产量低等缺点。课题组在国际上首次建立改良RAPD技术：通过延长从退火到延伸的ramp时间（即：RAPD的PCR扩增过程中降低从低温36℃退火到中温72℃延伸的PCR仪的升温速率，最佳升温速率为0.2摄氏度/秒），以提高RAPD产物的分辨率和产量，由此提高RAPD技术的扩增效率。该成果论文发表后单篇引用高达50次之多。

2、运用改良RAPD技术在国际上首次对道地药材赶黄草进行遗传特征分析和产地分子鉴定。构建了中药赶黄草和沟景天、中药紫花地丁和东北堇菜、天麻、药食两用植物桂圆和荔枝的改良RAPD技术分析体系，进行多态性分析和分子鉴定。同时，运用该类技术进行药材产地鉴定研究与推广应用。

3、运用改良RAPD技术结合SCAR标记进行研究，分析中药赶黄草和沟景天的遗传特征，获得SCAR标记克隆物种特异的DNA片段、中药紫花地丁和东北堇菜的特征新序列共八条，并在国际GenBank注册。

4、建立和运用RAPD技术开展了蜘蛛模板DNA的快速提取方法并适于RAPD分析、品种筛选和进化分类研究，并进行了生物防治推广应用。

5、建立和应用（vWF基因第40内含子的VNTR）及D18S51和D19S400等13个STR短串联重复序列位点，进行亲子鉴定和个体识别。

6、DNA指纹部分的研究成果集结汇总编入《精编医学分子生物学实验指导》，作为高等医学院校教材，2012年由中国医药科技出版社正式出版。

7、该项目选题新颖，创新性强，技术方法先进，数据准确，结果可靠，产生明显的经济效益、生态效益和社会效益。具有高的学术意义和应用价值，研究成果达到了国际同类研究的先进水平，可继续加强该技术的推广应用。