[01266242]天麻特异DNA分子标记序列及其应用

课题来源与背景：本成果来自湖南省自然科学基金项目(06JJ4036)和湖南省教育厅重点课题项目(06A001)。

天麻是我国四大名贵中药材之一，具有许多药理作用，而且毒副作用很小。由于野生天麻越来越少，以人工种植的天麻冒充野生天麻，以假天麻冒充真天麻，以非道地天麻冒充道地天麻的事件时有发生。而天麻质量和真伪鉴定通常凭肉眼观察和经验判断。由于缺乏科学鉴定方法，有时甚至将质量最差的天麻判定为最好的天麻。

采用DNA分子标记和化学指纹图谱鉴定天麻真伪和质量具有十分重要的意义和应用价值。

技术原理及性能指标：技术成果1：应用RAPD技术测定天麻的DNA指纹图谱，从DNA指纹图谱中选择所有天麻种群共有的DNA条带和少数优良种群特有的DNA条带，运用DNA回收、克隆、测序和生物信息学方法确定这两个DNA序列是新发现的，其中DNA序列-1(360bp)是所有天麻种群共有的DNA分子标记，DNA序列-2(790bp)是优良种群专有的DNA分子标记，根据这两个DNA序列两端的核苷酸顺序设计合成的特异引物，用于扩增待测样本，可根据有无特异DNA条带而鉴定天麻真伪和优良天麻品种。

技术成果2：通过比较筛选，得到了天麻有效化学成分的最佳萃取、分离和检测条件，建立了天麻化学指纹图谱测定技术，并构建了天麻特异性化学指纹图谱。应用该化学指纹图谱测定技术可根据指纹图谱的形状和特征峰以及峰的面积鉴定天麻质量高低，鉴别天麻的道地性，区分来自同一地区的野生天麻和人工种植天麻，鉴别天麻真伪，还可用于测定天麻有效成分天麻素含量和发现天麻优良种群和最适种植地区。

技术的创造性与先进性：这些技术成果在天麻鉴定方面尚属首创，可从分子水平对天麻质量和真伪作出全面正确鉴定，优于现有的其他方法，达到国际先进水平。

技术的成熟程度、适用范围和安全性：运用PCR技术和特异引物从DNA分子水平鉴定样本是公认的重复性好、可靠性强。化学指纹图谱技术已被国家食品药品监督管理局确定为监控和管理中草药及其制剂质量的首选新方法。