[01259848]山里红叶抗脂肪肝作用及药代动力学研究

一、任务来源

“山里红叶抗脂肪肝作用及药代动力学研究”申请鉴定课题，从2004年至今，分别获得辽宁省教育厅（No.2004D264）、辽宁省科技厅资助（No.20072073）及辽宁中医药大学优秀青年药学人才基金资助（No.yxrc0906）。

二、应用领域和技术原理

山里红叶the leaves of Crataegus pinnatifida Bge. var. major收载于2005版中华人民共和国药典，为辽宁地道药材，因此给新药研究创造便利条件，如对其进行深入活性成分及基础药理作用研究并科学利用和开发，一定能够为广大农民解决实际经济问题。研究山里红叶抗脂肪肝机制，进行其体内药物动力学研究，可促进新药研制的发展，随着人民生活水平提高，脂肪肝疾病发病率高。

由脂肪肝引起的肝炎、肝硬化及肝癌发病率也明显增高，如果能在此基础上开发研制中药新药，一定能够开发出疗效显著、价格便宜的中药，为众多患者造福，将有巨大的经济效益及社会效益。技术原理如下：

1．采用复合方式建立高血脂造成大鼠脂肪肝模型对山里红叶抗脂肪肝的药理作用进行研究。

2．山里红叶不同采收期指纹图谱研究。

HPLC色谱技术，采用内标法同时测定山里红叶提取物中8种活性成分。

3．药理作用机制研究。抗氧化与脂肪肝有着密切关系，为了研究抗脂肪肝作用机制，课题采用细胞培养技术对山里红叶提取物中活性部位主要黄酮类成分牡荆素-2-O-鼠李糖苷及牡荆素-4-O-葡萄糖苷进行抗氧化研究。

4．山里红叶主成分药代动力学研究。HPLC-UV法测定牡荆素-2-O-鼠李糖苷四个剂量静脉给药的大鼠血浆浓度分析方法，以橙皮苷为内标测定血浆中牡荆素-2-O-鼠李糖苷。UPLC-MS/MS法测定口服给药山里红叶提取物及单体牡荆素-2-O-鼠李糖苷大鼠血浆中牡荆素-2-O-鼠李糖苷。

三、性能指标（写明计划任务书或合同书要求的主要性能指标和实际达到的性能指标）。

1．确定活性部位，采用合理净化工艺制定标准提取物，采用HPLC同时测定多种活性成分，全面控制提取物质量，并在国外各发表一篇有影响力的论文。目前已达到预期指标，论文发表在Journal of Chromatographic Science，2009，47(3)：201-205。

2．进行体内的药物动力学研究，研究活性成分其在体内吸收、分布及代谢机制，为将来临床用药制定提供理论依据，并发表3篇国内及国外有影响力的高水平研究论文目前已达到预期指标。

Talanta，2007，72(4)：1500-1506、Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2007，44(3)：802-806及药物分析杂志，2009，29(1)：44-47。

3．采用细胞体外培养筛选活性成分，在细胞及更高水平上研究脂肪肝作用机制，明确活性成分作用机制，促进新药研发。目前已达到预期指标，并发表2篇国外有影响力的高水平研究论文：Chromatographia，2008，67(9-10)：679-686和ArchIVes of Pharmacal Research，2008，31(7)：878-885。

4．课题一旦完成，将申报专利，并进行下一步新药临床前试验研究。目前已达到预期指标。2009.6，“一种牡荆素衍生物分离方法”获发明专利（专利号：ZL200710011241.6），已转让给大连天宇制药厂，取得110万元经济效益。

四、与国外同类技术比较

国内山楂叶的研究有较多文献报道，多为体外个别化学成分在药材、提取物及各种剂型中简单测定及简单工艺研究。然而山里红叶活性部位及活性单体在体内的药物动力学研究尚属空白，国内山里红叶活性成分治疗脂肪肝作用未见报道。

国外山楂属其它种研究化学成研究较多，个别单体成分在体内的药代动力学研究有报道，但只为药代动力学简单研究，活性部位及活性成在体内药物动力学研究不深入，经文献检索国外在山里红叶治疗脂肪肝药理作用研究方面尚无报道。

本课题经多年研究，山里红叶抗脂肪肝为首次研究，采用UPLC-ESI-MS/MSE、HPLC及细胞培养技术研究山里红叶质量、药代动力学及药理作用居国内外领先水平，五篇相关研究论文被SCI收录。

五、成果的创造性、先进性

2004年以来，“山里红叶抗脂肪肝作用及药代动力学研究”课题研究已发表相关高水平研究论文7篇，其中SCI收录5篇均为第一作者。目前国内主要集中在山楂叶及山里红研究上，只是为化学成分简单体内研究，未能进行深入研究。我们课题组深入研究了山里红叶药理及药代动力学等方面，因此本研究课题居国内外同类研究领先水平。

首次采用HPLC技术内标法测定不同采收期山里红叶中8种成分在Journal of Chromatographic Science杂志上发表，被SCI核心期刊收录。

首次研究山里红叶提取物抗脂肪肝作用，在中华中医药学刊发表论文一篇。

目前正在进行辽宁省科技厅课题，研究发现山里红叶提取物对高血脂及酒精性脂肪肝都有显著作用。

在相关药理作用研究上，首次采用HPLC结合ECV304细胞进行vitexin-2-O-rhamnoside及vitexin-4-O-glucoside抗氧化作用研究，发表论文各一篇，均被SCI收录。

首次采用国际先进的UPLC-ESI-MS/MS技术，测定大鼠血浆中Ⅵtexin-2-O-rhamnoside，发表论文一篇。

另外，采用HPLC法测定大鼠血浆中vitexin-2-O-glucoside发表论文二篇（一篇被SCI收载，一篇被CA收载）。

获发明专利一项：2009.6“一种牡荆素衍生物分离方法”，专利号：ZL200710011241.6。为大连市天宇制药厂取得110万元经济效益。

六、作用意义（直接经济效益和社会意义）我们课题组不但研究山里红叶抗脂肪肝作用，而且在研究山里红叶主成分药代动力学研究时，独创vitexin-2-O-rhamnoside及vitexin-4-O-glucoside最佳分离方法，获发明专利一项：2009.6 ；“一种牡荆素衍生物分离方法”，专利号：ZL200710011241.6为大连天宇制药厂服务，取得110万元经济效益。

七、推广应用的范围、条件和前景以及存在的问题和改进意见进入21世纪，具有我国传统文化特色的中药，正面临着前所未有的发展机遇和挑战。脂肪肝见于各种疾病，许多疾病之所以久治不愈，肝功能不能恢复的原因之一，就是因为脂肪肝的存在。随着人们生活水平的不断提高，人类疾病医疗模式已由单纯的疾病治疗转变为预防、保健等模式，传统医药学正发挥着越来越大的作用，并备受青睐。中医药作为世界优秀传统医药文化，具有系统的理论体系、独特的诊疗方法、显著的临床疗效，正被越来越多的国家和地区所认识。随着人类生活水平的提高，脂肪肝发病率和检出率也日渐提高，中医药治疗脂肪肝越来越多的得到众多医师和患者的重视，并取得了较好的疗效。

然而，长期以来，中药的应用基础研究较少，导致中成药产品的有效性和安全性缺乏规范可靠的科学数据的证明，从原材料到最终产品缺少可控的质量标准。如何将传统医药学与现代科学技术相结合，建立和完善中药标准规范体系，实现中药现代化，在中药的药效物质基础、作用机理、应用理论以及新技术、新方法的应用等方面研究应不断深入，充分利用现代科技的方法和手段，借鉴国际通行的医药标准和规范，研究、开发中药产品应用于临床。

山里红叶抗脂肪肝疾病作用明显，目前脂肪肝疾病发病率明显增加，而治疗此类疾病中药尚缺乏，更急待研制此类中药。目前山里红叶抗脂肪及作用研究已经完成。在辽宁省科技厅课题基础上，课题下一步进行山里红叶治疗脂肪肝作用阶段研究，为中药新药开发打下坚实基础。

在研究山里红叶抗脂肪脂肪肝作用基础上，我们选择了高血脂及酒精性脂肪肝模型，研究山里红叶治疗脂肪肝作用中，考虑到目前脂肪肝发病主要由于高脂饮食及饮酒引起。目前得到辽宁省科技厅资助（No.20072073）及辽宁中医药大学优秀青年药学人才基金资助（No.yxrc0906）。

山里红叶收载于中华人民共和国药典，为辽宁地道药材，在辽宁普遍存在，大量山里红叶的利用，为广大农民解决药材销售实际经济问题，增加农民的经济效益。

山里红叶为常用中药，来源广泛，价格便宜，便于推广。如果能在此基础上开发研制中药新药，一定能够开发出疗效显著、价格便宜的中药，为众多患者造福，将有巨大的经济效益及社会效益。