[01257654]乳中主要致病菌分子生物学快速检测技术

课题来源和背景：“乳中主要致病菌分子生物学快速检测技术”为黑龙江省青年科学技术专向资金项目（项目编号：QC05C55），起止年限为2005年1月至2007年12月，目前已经按照合同要求提前完成了预期目标。

本项目是针对原料乳中经常出现的金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特菌等主要致病菌，能够实现快速、灵敏、准确检测，可以实际应用于原料乳主要致病菌的快速检测，从而保证乳品质量安全，保障人民群众的饮食健康。

其基本技术原理是通过确定致病菌靶基因、消除乳中影响基因组DNA模板提取和PCR扩增效果的干扰因素，建立以多重PCR为基础的检测技术。

达到的具体性能指标如下：

a.已经建立起以多重PCR技术为基础的乳中主要致病菌快速检测技术。

b.在我国唯一的乳品行业国家级工程技术中心——国家乳业工程技术研究中心进行了初步应用，并取得了良好效果。

c.通过本课题已经培养硕士研究生3名；在专业期刊发表相关学术论文4篇；主持人已被评为东北农业大学首批优秀青年学科（术）骨干，并被选为国家食品药品监督管理局保健食品审评专家、中国食品科学技术学会营养支持专业委员会理事。

技术的创造性、先进性：本项目将甲醇－乙醚－氨水混合液溶解乳脂肪、EDTA溶液破坏酪蛋白胶束并结合TE缓冲液洗涤菌体等综合前处理步骤与采用直径0.1mm的玻璃微珠进行快速振荡的技术整合，实现同时对多种致病菌（包括金黄色葡萄球菌这样的细胞壁较厚的革兰氏阳性菌）基因组DNA的有效提取，此点在国内外尚无文献报道，具有一定的创造性。此外，对牛乳中主要致病菌多重PCR检测的检出限为100 cfu/25ml，该水平在国内领先并与国外报道相当。

技术的成熟程度、使用范围和安全性：本技术稳定成熟，容易掌握。本课题所研究的分子生物学检测技术，一方面可以为广大乳品生产企业及时监控产品质量，避免以往检测技术耗时长的缺点，使产品早日出厂上市从而赢得市场，带来巨大的经济效益；另一方面，能够使食品安全监管部门有效控制乳和乳制品的卫生质量，避免致病菌污染造成的中毒事件，确保广大人民群众的饮食安全。

应用情况及存在的问题：本课题所研制的乳中主要致病菌分子生物学快速检测技术目前已经在国家乳业工程技术研究中心应用并取得良好的效果，与传统检测方法相比，检测时间短，灵敏度更高。