[01244269]高致病性PRRS弱毒苗（TJM-F92）免疫效果及其抗体的ADE作用研究

1.项目来源：金华市科技项目，计划编号2016-2-007。项目实施时间为：2016年8月1日至2019年7月30日。

2.研究目的与意义：本研究拟以PRRS弱毒苗（TJM-F92）株为对象，研究蓝耳病弱毒苗的免疫效果，及其抗体对高致病性PRRS免疫过程中ADE作用的影响。第一：通过研究，评估弱毒苗在高致病性蓝耳病免疫中作用与生物安全风险，为科学制定蓝耳病免疫程序提供翔实的实验依据。第二：揭示高致病性PRRS疫苗（TJM-F92）抗体对ADE作用及机制，获取准确的实验数据，评估疫苗产生低水平抗体依赖现象与其他疫苗的差异度。

3.项目主要研究内容

3.1 高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗（TJM-F92株）排毒监测，主要测定疫苗的散毒持续时间。

3.2 高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗（TJM-F92株）效力试验，测定该苗对强毒感染的保护力。

3.3 高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗（TJM-F92株）蓝特威抗体对ADE作用的试验。

3.4 高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗（TJM-F92株）蓝特威与其他毒株弱毒苗免疫效果对比。

3.5临床应用评估主要应用该苗不同的免疫程序，通过临床试验，免疫该苗后，猪群的临床健康表现，蓝耳病及其他相关疫病的发病情况，筛选该苗的最佳免疫程序从而评估该苗的免疫效果，该苗的保护优势，优化免疫方法。

4.主要创新（1）获得了高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗（TJM-F92株）疫苗散毒持续时间的相关数据。（2）确定了高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗（TJM-F92株）效力。（3）探索了（TJM-F92株）弱毒疫苗抗体对ADE作用的影响。结果表明：TJM-F92株弱毒苗免疫血清能够抑制蓝耳病毒的增值，弱化FcγRIIb介导的ADE效应。（4）建立了ADE作用试验研究的基本思路和技术路线，制定了蓝耳病免疫效果评估的技术指标（疫苗散毒时间、保护效力、ADE弱化效应、抗体水平、临床表现等）。

5.社会成果5.1系统制定并了疫苗免疫效果及安全评估的一般方法，提升了免疫研究的操作技能，掌握了应用荧光法检测疫苗毒的技术，并学习了 PRRSV 实时定量 PCR 检测方法，检测PRRSV 拷贝数的实验手段。

5.2.初步确立了以特异性抗体PRRSV增殖的影响试验、FcγRⅡb多抗阻断Fc介导ADE作用试验，比较不同毒株疫苗对ADE效应作用的研究方向，建立了蓝耳病疫苗安全性研究的基本思路发表论文：

（1）《不同PRRS弱毒苗免疫血清对FcγRIIb介导ADE效应的影响》.《福建畜牧兽医》，2019，6（3）：7-10

（2）《蒲地蓝颗粒制剂对HP-PRRS（TJM-F92）弱毒苗免疫效果的观察》.《中兽医药杂志》2018，12（6）：51-53

存在问题：

（1）疫苗毒在猪群内的循环检测难。疫苗毒在猪群中的散毒检测困难。本研究中，我们采用了双重荧光定量PCR法检测，本方法试验操作繁琐，试验要求高，费用大，对多通量，多样品的检测，难以持续。为此，项目组多次前往、南京农业大学、上海兽医研究所等单位，探讨解决办法。

（2）兔抗猪FcγRIIb多抗制备难度较大

（3）TJM-F92疫苗株弱化ADE效应的机制探索未深入但是该检测成本较高，受经费限制，测定的样品数量较少，这对实验数据的广谱性和科学性存在负向的影响。

（4）应用推广猪群偏少项目正式实施进入临床应用阶段时，我省猪群的蓝耳病疫情比较平稳，部分目标试验场停用了蓝耳病商品疫苗。特别是部分养殖户对高致病毒株存在极大的误解，把高致病性毒株与高风险等同起来，对临床应用试验造成了一定的影响。

2018年8月以后，受ASF疫情的影响，全省各猪场都大大提升了生物安全措施，制定了临时的防疫制度，调整了免疫措施。本项目临床推广实施受影响极大，临床应用仅在少数猪群中进行，且选取的目标猪群样本少，样本的代表性不够完整，对数据的获得产生了一定的影响。