[01224596]南方牛血液循环系统寄生虫病防制新技术研究

1.课题来源与背景： 湖南省500多万公顷的天然草场,使得山区人们利用自然环境放牧牛的情况很普遍,到目前湖南的自治州、怀化、永州、邵阳地区等地区饲养的黄牛、水牛及奶牛数量达近200万头。但是在老百姓长期的养殖习惯和饲养管理条件下,牛只的生长速度慢,且因湖南特殊的地理环境,在洞庭湖区放牧牛只面临着日本血吸虫病的危害,在山区放牧的牛只因节肢动物叮咬面临血液原虫的感染,尤其在湘、川、黔交界的吉首牛市交易的集散地,来自湖南周边省市的牛只随着交易的进行给血液原虫病的传播提供了机会。针对这些问题,课题组查阅资料,提出研究方案,在湖南省科技厅、湖南省教育厅、湖南省畜牧水产局的支持下,对南方牛养殖过程中存在的问题及市场需要,在疾病调查、诊疗和实验经验基础上,用分子生物学方法对分离到的病原体进行种类鉴定及生物学功能特点研究,建立了针对湖南省牛体内流行的血液循环系统寄生虫病的诊断方法,并在这些基础上提出了牛血液循环系统寄生虫病防控措施及实施、推广应用。 2.技术原理与性能：通过对湖南省不同牛群血液循环系统寄生虫病的感染情况系统的调查,在此基础上采用PCR等分子生物学技术与方法,对影响牛生长发育严重的血液循环系统寄生虫病的病原体特征、诊断技术及防制做了深入的研究。 3.成果的创造性与先进性： 首次在湖南省对牛血液原虫进行16SRNA基因序列分析,证实了在长沙地区及南山牧场流行的主要血液原虫为无浆体及焦虫。 首次查明长沙地区牛无浆体病的传播媒介是厩蝇。 首次在国内采用免疫抑制技术建立了牛附红细胞体病、牛无浆体病的小鼠、家兔模型。 国内首次建立奶牛无浆体MSP4基因SYBRGreen I 荧光定量PCR诊断方法。本诊断方法能够检出MSP4基因质粒达104 copies/μL个拷贝数,可在5h之内做出定性、绝对定量的检测结果。 扩增了日本血吸虫线粒体和核糖体基因序列,并送GeneBank登录获得了10个登录号。用SRAP技术鉴定在湖南常德、君山、钱粮湖、汨罗的虫体在基因水平上无差异,遗传进化关系近。 4.成熟性与使用安全性 课题组使用的螨虱灵是自主研发的,SYBR-Green I荧光定量PCR方法的建立是安全可靠的。 5.推广应用情况以及存在的问题和改进意见 课题组采用“SYBR-Green I荧光定量PCR方法” 可在5h之内做出定性、绝对定量的检测结果。在2008年-2012年期间对湖南长沙、邵阳等地区肉牛场、奶牛场进行无浆体病的诊断检测,临床检测出感染本病的病例2200多例,做到疾病的早期诊断,及时治疗,为这些养殖场减少损失1000多万元。 课题组自主研制的螨虱灵,现已在企业生产,并针对血液原虫病提出了41+52+93“联合用药策略进行推广应用。2010年～3013年在湖南省的双牌、宁远、邵阳、吉首、花垣、平江、道县、城步等19个县市的46万多头水牛、黄牛中进行推广应用。4年来,在这些县市把投入的精料、青草、干草、人工工资等全部记录生产费用,4年来,在推广县养牛户共新增总产值达85649万元,新增纯收入20094万元。而且带动了实施区域周边乡镇老百姓养牛的积极性。