[01214463]牛支原体膜相关抗原的筛选、鉴定及对宿主细胞粘附作用的研究

1.课题来源与背景; 牛支原体是牛传染性肺炎的主要病原之一,其感染引起的牛支原体肺炎是严重危害养牛业的一种疫病,而且可以引起牛的乳房炎和关节炎等多种疾病。目前,该病呈世界性分布。在欧洲,仅英国每年就有约15.7万头因此而死亡。而在美国,每年该病造成的损失达1.40亿美元。 近年来,牛支原体感染所导致的疫情在国内各地频繁发生,对我国的养牛业造成了严重的危害。 2.研究目的与意义; 开展对牛支原体保护性抗原及粘附作用的研究,将有助于研究该病原的致病机制,为该病的深入研究疫苗和诊断试剂的开发奠定基础。 3.主要论点与论据; 牛支原体膜相关抗原参与黏附等生物功能,在病原体的致病机制方面具有重要意义,而且牛支原体膜相关抗原具有很好的免疫原性,可以作为疫苗的重要候选因子。 4.创见与创新; 在二维电泳基础上,应用western-blotting筛选牛支原体主要的膜相关抗原,并经质谱分析确定所筛选出牛支原体膜表面抗原P48、二硫辛酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶E1 、E1β亚基,进而通过PCR扩增相关蛋白基因并构建其大肠杆菌表面展示载体,载体转化大肠杆菌表达菌后将表面展示有目的蛋白的大肠杆菌与宿主细胞互作以确定蛋白对宿主细胞的粘附作用及亚细胞定位研究,从而为进一步研究目标蛋白的其他生物学特性奠定基础,为更广泛开展牛支原体的相关研究提供科学资料和积累技术手段。 5.社会经济效益,存在的问题; 本课题将为牛支原体病的诊断和疫苗研发奠定一定的理论基础,相关理论成果在国家级学术期刊发表论文3篇。本项目在执行过程中,虽然已完成了目标蛋白在大肠杆菌表面的展示,但由于两次购买的牛胚气管细胞EBTr （NBL-4）均难于获得良好的培养,加之牛胚气管细胞或牛肺细胞价格昂贵,从而使表面展示目标蛋白的大肠杆菌对细胞的粘附试验无法完成。因此,项目组调整试验方案,完成了目标蛋白的免疫原性分析及其在牛支原体内的初步定位等研究内容。 6.历年获奖情况; 无。