[01213138]家蝇抗菌肽/蛋白提纯条件优化及其基因工程菌株构建

1.成果的创造性、先进性，与国内外同类技术比较：　　1）本项目构建了Javisol+瞬时微波+细菌和真菌混合菌液组合诱导源。建立了葡聚糖凝胶G75+Bio-gel P6+CM-Sepharose Fast Flow层析分离纯化家蝇抗菌肽/蛋白的方法，得到了约16.3kDa大小的抗菌肽/蛋白，收率达到0.74mg/g家蝇幼虫。本项目中所建立的组合诱导源属于首次使用，提取纯化方法也具有一定的创新性。　　2）扩增了家蝇抗菌肽/蛋白的基因，构建了高效表达家蝇抗菌肽/蛋白的大肠杆菌工程菌株YJ001，建立了分段控温发酵和HighQ+MonoQ柱纯化重组家蝇抗菌肽/蛋白的纯化体系，重组蛋白表达率大于24μg/mL发酵液。和国内外同类技术相比较，本项目构建了新的基因工程菌株，重组蛋白的表达率较高。　　2.项目意义：　　寻找新型的抗生素是当前一个相当迫切的问题。抗菌肽/蛋白具有强烈的抗菌作用和不同于传统抗生素的抗菌机理，非常有希望成为新一代的抗菌、抗肿瘤药物，具有很大的开发潜力。本项目旨在对抗菌肽/蛋白的工业大规模生产进行前期的应用基础性研究，以期获得能够应用于工业化生产的最优化的诱导条件、分离纯化条件和可用于工业发酵生产的高效表达抗菌肽/蛋白的基因工程菌株。本课题的研究具有重要的应用价值和一定的理论意义。　　3.应用前景：　　河北省是我国著名的医药产业大省，具有许多著名的医药企业，抗生素的产量在全国也名列前茅。本课题主要是对抗菌肽/蛋白质提取、纯化和基因工程菌株构建的研究，具有良好的市场推广前景。　　本项目可以依托河北省的医药产业，寻找具有较强技术水平和科研能力的企业，进行中试，为大规模生产探索条件。同时，联合相关企业和医院，积极进行抗菌肽/蛋白的初期动物实验，为开发新药做必要的前期准备工作。