[01195401]靶向病毒与精液淀粉样纤维的多功能新型杀微生物剂的研究

拟从四个方面进行研究： 1)ADS-J1抑制SEVI形成与拮抗SEVI促进病毒感染的机制; 2)以ADS-J1为先导化合物,合成新型的磺酸化的萘衍生物,评价其活性,获得候选化合物; 3)评价候选化合物对免疫功能和阴道粘膜炎症反应的影响; 4)评价候选化合物在精液中与抗病毒药物联合应用的抗病毒效果。 （1）ADS-J1抑制SEVI形成与拮抗SEVI促进病毒感染的机制（部分完成） ADS-J1是申请人所在团队早期利用计算机辅助设计方法筛选得到的具有低μM级的HIV进入抑制剂,其作用靶点为病毒包膜蛋白gp41与gp120。由于ADS-J1具有磺酸基团,带负电荷,而SEVI具有正电荷基团,理论上由于正负静电作用力,ADS-J1能结合多肽PAP248-286（形成SEVI的原型多肽）,从而抑制SEVI的形成,而且ADS-J1能结合到SEVI上,抑制SEVI结合病毒,从而拮抗SEVI介导的病毒增强作用。申请人前期结果表明,ADS-J1能抑制SEVI形成,并拮抗SEVI介导的病毒感染的增强作用;与聚阴离子化合物不同,ADS-J1并不促进SEVI的形成;但硫酸化的寡糖却不具备抑制SEVI形成的作用,结果提示ADS-J1的分子量大小和磺酸化程度与其作用相关。我们首先拟对ADS-J1抑制SEVI形成与拮抗SEVI促进病毒感染的机制进行研究,为下 一步优化化合物结构奠定基础。 （2）以ADS-J1为先导化合物合成新型的磺酸化萘衍生物,评价其活性,获得候选化合物虽然前期研究表明,ADS-J1在HIV性传播途径中,它发挥着多重效应,包括：抑制病毒感染;抑制SEVI的形成;拮抗SEVI介导的病毒感染增强作用。但ADS-J1的偶氮键有潜在的致癌性,因此我们拟重点合成一系列C-C键取代偶氮键的萘取代物,包括不同分子量大小,不同磺酸化程度的化合物,以评价其抗病毒效果和抑制SEVI的作用,研究其构效关系,确定2-4个候选药物。 （3）评价候选化合物对免疫功能和阴道粘膜炎症反应的影响 理想的杀微生物剂应不导致阴道损伤,不产生过敏反应,不造成阴道内菌群的失调。因此,我们拟在细胞水平上评价候选药物对阴道上皮细胞的炎症反应及免疫细胞免疫功能的影响;采用家兔动物模型,对阴道灌洗液和组织相关指标进行测定,评价候选化合物的安全性。 （4）评价候选化合物在精液中与抗病毒药物联合应用的抗病毒效果耐药病毒株的产生已经凸显为艾滋病治疗的第一大问题。采用类似“鸡尾酒疗法”的方式,将不同作用机制的杀微生物剂合用,既能提高药物抗病毒活性,也可延缓耐药株的产生,将产生较好的预防效果。因此,我们拟将候选药物与抗病毒药物（主要选择正在临床前阶段的杀微生物剂替诺福韦与马拉维诺）联合应用,模拟真实的性交情况,在精液中评价其抗HIV活性的协同治疗效果,从复方制剂角度预防HIV性传播。 拟解决的关键技术问题。 （1）如何选择、优化实验条件,制备C-C键取代偶氮键的ADS-J1类似物,使其既具有抗病毒活性,又具备抑制SEVI形成、拮抗SEVI增强病毒感染效果的化合物,作为新型多功能杀微生物剂,是本项目首先解决的关键科学问题; （2）在SEVI和精液存在下,正确评价化合物的抗病毒效果、抑制SEVI形成及拮抗SEVI增强病毒感染的效果,从而选择具有潜在可用于临床的候选药物,是本项目亮点与重点。 实际完成情况 （1）阐明寡阴离子类化合物抑制SEVI的作用机制及其构效关系; （2）筛选到suramin等3个活性化合物,是潜在的既具有抗病毒效果又双效抑制SEVI的多功能候选杀微生物剂,申报国家发明专利3项; （3）发表SCI论文6篇,其中一作/通讯作者论文3篇,另外一篇通讯作者SCI论文1篇在返修中;发表中文核心论文3篇,其中通讯作者论文1篇; （4）申报中国发明专利5项; （5）共培养研究生6名,其中1名博士,5名硕士,1名博士和2名硕士已顺利毕业,另外3名硕士在读。我们已完成验收指标。另外,项目负责人在项目执行期间,获得国家自然科学基金面上项目1项,广东省自然科学基金自由申请项目1项,校级创新驱动项目1项;指导4名本科生参加“第十一届广州大学城实验综合技能邀请赛暨广东工业大学第十三届学生实验综合技能竞赛”并获一等奖、二等奖各1项;指导研究生获学术会议优秀论文三等奖1项;积极参与学术交流,参加7次学术会议,其中2次为国际学术会议,项目负责人获1次国际学术会议奖学金。