[01190964]通过操纵调控基因提高荧光假单胞菌的生防效果
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技术详细介绍
GacS/GacA双因子调控系统对荧光假单胞杆菌次生代谢物的产生起着重要的调控作用。本研究应用PCR介导的染色体文库克隆技术从我国的生防荧光假单胞杆菌中克隆了抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚（2,4-DAPG）的合成基因及其调控基因gacA，通过遗传学试验说明二者是构成生防菌2P24生防功能的重要因子。gacA基因与无启动子的绿色荧光蛋白报告基因或b-半乳糖苷酶基因同相串联，以报告基因的表达指示gacA的表达。此结构通过质粒或Tn5转座子整合到生防菌株染色体上，增加gacA的拷贝数，抗生素产量提高1-5倍，并增强了生防效果。以绿色荧光蛋白为标记的定殖研究说明大多数菌体聚集于根组织的凹陷部，根表皮伤口处及细胞间的缝隙中，其种群数量从小麦根基向根尖呈明显减少趋势。本项目解析了生防荧光假单胞杆菌2P24生防功能的部分遗传学基础，并说明通过基因工程提高生防菌的抗生素产量和生防能力是一条可行之路。