[01190765]抗芜菁花叶病毒转基因芜菁的研究

温州盘菜离体再生体系的建立：将温州盘菜(Brassica campestris L．Ssp rapifera Matzg)的种子经挑选，用吐温-20摇洗5min，清水冲净后经70％的酒精处理90s，5％的次氯酸钠浸泡7-8min，无菌水冲洗4-5次后，无菌播种于发芽培养基上。并在25℃±1℃，16h光照／8h黑暗的光周期，2000～2500lx光强下培养，获得无菌苗。取4-5d的无菌苗用手术刀片齐生长点切下带子叶柄的子叶(以下简称带柄子叶)、只有子叶无子叶柄(以下简称子叶块)、子叶柄及下胚轴等4种外植体，分别接种到各种培养基上。带柄子叶进行插植接种，即把子叶柄插入培养基中2-3mm，子叶柄、子叶块和下胚轴子放于培养基上。通过筛选，最后用带柄子叶作为诱导再生芽的外植体。通过正交试验设计分化培养中激素的配比及浓度，经过筛选得到五组培养基。在外植体接种后约3周，将分化的不定芽及生长状况较好的愈伤组织块自基部切下转入继代养基中进行继代。待通过继代的芽长至2～2.5cm高时将其自芽基部切下转人生根培养基进行生根。经2～3周再生苗不定根长成后，开瓶锻炼24～48h，小心洗去根部的培养基后栽入含水量为60％(泥炭土：珍珠岩 = 3：1)的培养土中，用塑料薄膜覆盖保湿1-2d后揭开，培养2周后移人大田进行正常栽培管理，创新(特色)与应用：目前国内外尚未有芜菁离体再生体系建立的报道。本实验初步建立了温州盘菜的离体再生体系，为今后高频再生体系的近一步建立，以及为转抗芜菁花叶病毒基因遗传转化体系的建立打下基础，作为抗病育种的一条新的途径。另外，通过对芜菁再生体系的构建对于研究植根膨大类作物的离体再生和芸薹属作物不同基因刑离体再生的难易也有一定的借鉴意义。