[01178504]壳聚糖修饰的PLGA纳米材料固定化木聚糖酶Syn-ST的技术研究

以产木聚糖酶的黑曲霉（Aspergillus niger）XZ-3S为实验菌种,利用生物信息学方法,在酶活性中心位点进行氨基酸的取代或将黑曲霉XZ-3S木聚糖酶Xyn43A成熟肽基因插入表达载体,构建基因工程菌。以获得优良的木聚糖酶。其次通过生物合成与木聚糖酶有效结合的纳米载体,将突变酶修饰为固定化酶。具体为： （1）以溶剂挥发法制备的PLGA纳米粒为材料（粒径150－200nm）,分别采用壳聚糖及生物素化的壳聚糖修饰纳米材料,通过形态、粒径、表面电势及释酶性质等因素,优化修饰的比例,选择最优化的修饰条件制备纳米粒; （2）以Xyn II木聚糖酶为研究对象,通过对Xyn II木聚糖酶的分离纯化和性质研究初步掌握天然木聚糖酶的基本性质,以Family10的木聚糖酶保守序列设计引物,对Xyn II的保守序列进行PCR反应,从基因组DNA中所克隆的木聚糖酶基因进行酸碱及热稳定性改造,在毕赤酵母中表达并检测表达能力; （3）以分子生物学为手段,对木聚糖酶基因进行定点诱变和定向改造,实现酶稳定性等生产性能的提高; （4）采用合成的两种PLGA纳米材料固定游离酶,采用正交实验及方差分析探讨固定化的最优条件,并拟通过傅里叶变换红外线光谱等验证酶与载体的连接; （5）比较游离酶和固定化酶在各种金属离子溶液、不同浓度的金属离子溶液及在非水相体系（包括有机溶剂、离子液）中的催化活性。