[01169674]基因装载组织工程支架及其诱导肝细胞聚集体内微血管形成的研究
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生物医药
类型:
非专利
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技术详细介绍
本研究首先构建了含肝细胞生长因子红色荧光融合蛋白质粒基因,考察了壳聚糖/海藻酸复合聚电解质三维多孔支架基质组成和制备条件等对DNA/PEI纳米粒控制释放行为的影响,并考察了载基因支架三维共培养肝细胞/NIH3T3的细胞形态/功能。同位素标记质粒基因释放实验结果表明,随支架中聚阴离子海藻酸组分的提高,不仅提高了支架的基因装载量,并有效抑制了壳聚糖/海藻酸复合三维多孔支架中质粒基因的突释;同时,本研究优化的HGF基因装载壳聚糖/海藻酸复合支架用于肝细胞/NIH3T3细胞三维共培养,RT-PCR和ELISA检测结果进一步表明其显著提高了细胞的细胞转染效率及外源基因HGF的蛋白表达水平,同时促进了肝细胞聚集体的形成,其肝功能尿素合成能力也得到了显著的改善。由此可见,基因装载肝组织工程支架可有效改善细胞-基质、细胞-生长因子及细胞-细胞间的相互作用,将会成为一种具有应用前景的肝组织工程支架。
本研究首先构建了含肝细胞生长因子红色荧光融合蛋白质粒基因,考察了壳聚糖/海藻酸复合聚电解质三维多孔支架基质组成和制备条件等对DNA/PEI纳米粒控制释放行为的影响,并考察了载基因支架三维共培养肝细胞/NIH3T3的细胞形态/功能。同位素标记质粒基因释放实验结果表明,随支架中聚阴离子海藻酸组分的提高,不仅提高了支架的基因装载量,并有效抑制了壳聚糖/海藻酸复合三维多孔支架中质粒基因的突释;同时,本研究优化的HGF基因装载壳聚糖/海藻酸复合支架用于肝细胞/NIH3T3细胞三维共培养,RT-PCR和ELISA检测结果进一步表明其显著提高了细胞的细胞转染效率及外源基因HGF的蛋白表达水平,同时促进了肝细胞聚集体的形成,其肝功能尿素合成能力也得到了显著的改善。由此可见,基因装载肝组织工程支架可有效改善细胞-基质、细胞-生长因子及细胞-细胞间的相互作用,将会成为一种具有应用前景的肝组织工程支架。