[01161159]仙茅苷A促脑卒中后血管新生与CREB/EGR-3和PI3K/AKT信号通路相关的分子机制

血管新生是脑缺血后神经功能恢复的前提和基础。仙茅苷A为仙茅属植物仙茅的单体有效成分。通过制备纯化仙茅苷,开展人脑微血管内皮细胞细胞（HBMEC）毒性试验、增殖试验、划痕试验、成管试验及与CREB抑制剂KG-501,VEGF拮抗剂sFlt-1、受体阻滞剂SU1498、 EGR-3 siRNA合用,观察仙茅苷A对HBMEC毛细血管样结构形成;制备人HBMEC体外缺氧模型,观测细胞活力、Caspase-3活性及相关蛋白表达情况,ELISA法分析HBMEC体外培养相关蛋白表达。大鼠原代主动脉内皮细胞（RAEC）与平滑肌细胞（RASMC）共培养,观察毛细血管样结构形成及相关蛋白表达影响。制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,观测缺血7和14天的BBB,分析缺血半暗带相关蛋白表达。结果提纯获得高纯度仙茅苷A 10 g以上,满足了药理实验对样品的需求。 仙茅苷A 3 μM以上诱导HBMEC和RASMC增殖,减少划痕直线间隔,促进HBMEC、RASMC与RAEC共培养毛细血管样结构形成;与CREB抑制剂KG-501,VEGF拮抗剂sFlt-1、受体阻滞剂SU1498、 EGR-3 siRNA合用降低毛细血管样结构形成;抑制体外HBMEC缺氧模型的细胞活力的降低,抑制凋亡发生;仙茅苷A 9 μM增加p-CREB,p-VEGFR2的表达,而且仙茅苷A 上调VEGF 依赖CREB。仙茅苷9 μM增加RASMC的Ang1,Wnt5a,β-catenin和Cyclin D1的表达,增加共培养RAEC和RASMC的 Ang1,VEGF,Tie2,Wnt5a,β-catenin和Cyclin D1的表达。仙茅苷A 10 mg/kg明显降低缺血7和14天的BBB;降低3,7,14天神经行为缺陷,增加缺血区VEGF,p-VEGFR2, CREB,p-CREB,Egr-3,VCAM-1和CD31表达。仙茅苷A促缺血后血管新生过程与VCAM-1/Egr-3/CREB/VEGF、Wnt5a/β-catenin及Ang1 /Tie-2信号通路直接相关。 上述研究既可阐明仙茅苷A促脑缺血损伤后大鼠血管新生的分子机制,为仙茅苷A开发为抗脑缺血损伤的一类新药提供理论依据,还可建立促进脑缺血后脑血管新生的细胞与分子筛选体系,服务于基于该作用机制的抗脑缺血药物的筛选。