[01152535]改造Cre/loxP系统获得无选择标记产花生四烯酸转基因大豆的研究

本课题在克隆大豆种子特异性启动子BCSP952和从球等鞭金藻、眼虫藻、三角褐指藻中克隆的Δ9-脂肪酸延长酶ASE2以及Δ8-和Δ5-脂肪酸脱氢酶基因的基础上,首先构建了共表达上述三个基因的酵母表达载体pYAE5,并在酿酒酵母中重构了合成ARA的代谢途径。然后构建了无筛选标记表达载体pXB,建立了受种子特异性启动子和雌二醇双重调控的无选择标记的大豆转化体系。同时对BCSP952启动子进行改造,将2个Sph序列元件,1个ABRE 序列元件和1个Sph序列元件以及2个ABRE序列元件分别插入到BCSP952启动子的-212位点,结果表明增加ABRE元件有助于提高启动子的活性。最后利用上述克隆的三个基因和大豆种子启动子在大豆中构建了合成ARA的代谢途径,建立了一种具有自主知识产权的无选择标记的产ARA的转基因大豆方法。该课题的完成为在大豆中转入更多个基因而合成诸如EPA和DHA等高附加值的药物成分及改良的大豆品质提供了强有力的工具,同时增加了人们对转基因大豆食品安全性的认识,因此具有重要的理论意义和实用价值。