[01142058]新型昆虫杂交杆状病毒表达载体的构建和改进

该项目属农业和生物技术高科技领域。基因工程表达系统是当今生物技术的核心技术。昆虫－病毒基因表达系统是四大表达系统之一，具有重要的应用价值。该项目针对家蚕核型多角体病毒BmNPV和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒AcNPV表达系统各自的优缺点，运用基因重组技术构建、开发了能融合两者优势的新型杂交杆状病毒表达系统，扩大了家蚕杆状病毒的寄主范围，并利用“基因剔除”技术删除了杆状病毒本身的一种主要蛋白酶基因，极大提高了该系统的生产效率。该表达系统具有以下突出优点：①寄主范围广，既能感染家蚕，又能感染目前最常用Sf21，Sf9及Tn-5培养细胞；②比目前的AcNPV和BmNPV表达系统具有更高的表达效率，重组蛋白生产水平提高50％～60％；③该系统对家蚕和常用培养细胞具有双重感染性，既可利用Sf21，Sf9细胞及大型的Tn-5细胞进行无菌状态下的悬浮培养法快速生产重组蛋白，又可在家蚕幼虫中表达进行大规模生产，有利于实现生物技术的产业化开发。该成果的先进性在于：利用了具有我国特色的家蚕BmNPV为基础构建成功一个新型优良的基因表达系统，研究成果具有原创性，已获国家发明专利一项，拥有我国自主知识产权，能为我国的未来的基因工程和生物技术产业提供了一个强有力的技术工具。该成果应用前景广阔，在工程疫苗和药物生产、蛋白质研究、生物杀虫剂等领域具有巨大潜在的应用前景。已有上海金伟生物技术公司、杭州科助基因公司等多家国内尖端企业引进采用该技术，进行人血清白蛋白、干扰素等药物蛋白的生产，取得了良好的经济和社会效益 2004年6月27日，由浙江大学动物科学学院特种经济动物科学系吴小锋副教授主持的省科技厅国际合作重点项目“新型昆虫杂交杆状病毒表达载体的构建和改进”顺利通过省科技厅主持的成果鉴定。 鉴定委员会听取了项目组的研究总结报告、工作报告，并审阅了提供鉴定的全部技术文件、查新报告，经过认真讨论，一致认为：该研究立题正确，试验设计合理，研究手段先进，数据资料可靠，结论科学，技术上有大的突破，研究成果具有原创性，拥有我国自主知识产权。该研究利用基因工程方法成功构建了能扩大家蚕杆状病毒寄主范围的新型杂交重组病毒，并应用基因敲除技术对构建的杂交病毒进行改造，敲除了病毒自身蛋白酶基因，很好地解决了家蚕BmNPV寄主域狭窄和表达后期重组蛋白易受蛋白酶降解两个关键问题；并运用该系统在家蚕幼虫或蛹体内成功表达生产了人FGF、VEGF等蛋白，建立了蛋白纯化、活性分析等相应的技术应用体系。项目总体评价达到同类研究的国际先进水平，鉴定委员会一致同意通过鉴定。并建议进一步支持其尽快进行应用开发，以取得更大的社会和经济效益。