[01136646]新型生物佐剂蛋氨酸脑腓肽增强鸡马立克疫苗免疫力的应用与推广

一、项目背景与研究目的和意义 鸡马立克氏病（Marek’s Disease,MD）是由马立克氏病毒（Marek’s Disease Virus,MDV）引起的一种淋巴细胞增生性传染病。自20世纪70年代广泛使用火鸡疱疹病毒（HVT）疫苗以来,使本病的发生得到了相当程度的控制,但在全世界范围内,MD仍是养禽业经济上的一个主要威胁。近年来世界各地相继发现毒力极强的MD,2005年,欧洲、澳大利亚、南美洲、亚洲相继发生了MD强毒株的流行,死亡率在50～60%,在2008年到2011年,我国四川和新疆等地区相继暴发了该病,死亡率为15%～80%,给我国的养禽业造成的损失达数千万元甚至上亿元。由于MDV有向更强毒力进化的倾向,现有疫苗免疫产生的抗体滴度并不能对所有的强毒株提供完全的保护,免疫失败屡有发生,造成该病在局部地区爆发,给本病的防制带来了新的问题。因此增强疫苗免疫效果,延长疫苗免疫保护期,阻止病毒毒力增强是防治鸡马立克氏病的关键所在。新型生物佐剂蛋氨酸脑啡肽（MENK）是一种内源性的阿片肽,具有可逆性,无细胞毒性,长期应用不会引起正常组织细胞的损伤,本课题组多年前期工作基础表明,10～12mol/LMENK能够抗肿瘤、抗病毒、活化免疫系统,（相关研究成果已在SCI,全国中文核心期刊发表,详见佐证材料）,兼具免疫调节和免疫治疗的双重特性,对此,本项目开展了蛋氨酸脑啡肽（MENK）对禽马立克细胞（MSB-1）生长抑制作用、凋亡诱导效应以及增强MD疫苗免疫力的研究,为全面提高辽宁省MD的免疫防控效果和效率以及我省畜牧生产小区的动物疫病防控提供了一个全新的科学集成的技术体系,进而为全面提升我省动物疫病免疫防控的整体水平奠定了基础。 二、主要论点与论据 1.蛋氨酸脑啡肽对禽马立克细胞株（MSB-1）增殖的影响 通过倒置显微镜对MSB-1细胞株进行形态学观察,MTT法检测蛋氨酸脑腓肽对MSB-1细胞株的生长抑制作用,流式细胞术进行凋亡检测,结果表明：蛋氨酸脑腓肽对MSB-1细胞株具有增殖抑制效应及凋亡诱导效应,是具有免疫治疗作用的新型佐剂,具有很大的发展潜力。 2.蛋氨酸脑啡肽增强禽马立克疫苗免疫力的研究 （1）采用T淋巴细胞E-花环和α-醋酸萘酯酶进行免疫效力检测,采用ELISA方法进行免疫抗体长效性检测,ELISA和RT-PCR方法对细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-12进行检测,结果表明：蛋氨酸脑腓肽可以明显提高鸡的细胞免疫功能和体液免疫功能。 （2）急性和慢性毒性试验表明,蛋氨酸脑腓肽对鸡安全,无毒副作用。 （3）田间试验和区域试验表明,此雏鸡进行鸡MD疫苗免疫时,配合10～12mol/L蛋氨酸脑腓肽水剂注射,可以增强机体免疫功能,延长疫苗免疫保护期,提高鸡成活率,降低发病率和死亡率,具有显著的经济效益。 三、创新点 1.我们的工作有助于进一步完善对MENK生物学活性的了解,进一步确定了MENK具有免疫治疗和免疫防治的双重特性,为兼具治疗和预防性的MD新型疫苗的研制提供新的思路和参考。 2.明确了MD防治的新靶点和新思路。 3.探索了MD肿瘤细胞演进过程的靶向干预新模式,从而为全面控制MD的流行开创新的突破口。 4.研究结果将对降低鸡免疫抑制性疾病的发生、提高疫苗免疫效率、代替传统抗生素药物、开发有效的生物疫苗免疫增强剂具有重要意义。 四、社会经济效益 首先,本项目在全省6个地市的沈阳农业大学畜牧兽医学院校外实习基地和各区县的试验场进行了为其一年的应用,并与当地动物防疫部门紧密合作进行推广,应用于20万只鸡,经实际测算和统计期内统计分析的结果,肉用雏鸡和蛋雏鸡成活率分别为96.3%和97.1%,分别高于以往8.5%和8.2%,鸡只感染法氏囊、新城疫和禽流感的感染率下降35%以上;实现总收入46.2968万元,实现收益36.1251万元;同时,还避免了禽流感疫情、尤其是H5和H7亚型疫情发生时疫情处置经费等巨大的经济损失。因此,本项目具有极其显著的经济效益。其次,本项目还具有重要的社会效益和生态效益。主要表现在增加养殖企业整体效益,减少病原对环境的污染,净化了养殖环境,减少了由于感染导致鸡只免疫抑制、呼吸道感染、继发感染和大量用药导致的鸡产品中药物残留,提高我省肉鸡、蛋鸡养殖及其产品的质量安全及在国内外市场的竞争力。综上,MENK可以增强机体细胞免疫和体液免疫功能,延长疫苗免疫保护期,提高雏鸡成活率,降低发病率和死亡率,无毒性,无剂量依赖性、对禽马立克病及其他疾病具有免疫治疗和免疫防治的双重特性,是具有重要开发价值的新型生物佐剂,其生物学作用的应用会对我省乃至全国疫病防治新思路起到引领示范作用,并带来巨大的经济、社会、生态效益。 五、获奖：2014年辽宁省畜牧科技贡献奖一等奖