[01127014]饲用抗菌肽CecMd-CheRc高效表达及生物提取关键技术

抗菌肽因其独特的作用机理、高效的抗菌活力和毒副作用小等优点,已经成为医药卫生、农业、食品等领域研究的的热点,也将成为传统抗生素的替代品。然而,目前抗菌肽在畜牧业中应用的研究仅处在起步阶段,尚存在一些亟待解决的问题,主要包括抗菌肽的效果尚不完美、资源有限、产量有限等。本项目围绕饲用抗菌肽的高效表达、生物提取及在饲料中的应用等关键技术进行探索研究,并从2010年10月起,以黑龙江省科技攻关项目“饲用抗菌肽CecMd-CheRc高效表达及生物提取关键技术”对饲用抗菌肽的生产和应用进行系列研究。根据家蝇抗菌肽Cec Md基因信息分析,建立pGEX-6P-1/Cec Md/BL21（DE3）重组基因工程菌株,优化重组基因工程菌株培养生长的高效表达条件;设计出两条具有抗菌肽潜力的杂合肽,构建其基因工程菌,建立高效培养条件;批次发酵高效表达的杂合抗菌肽基因工程菌株,制备杂合抗菌肽饲料添加剂,饲喂效果良好,并在饲料企业中推广应用。 项目提出抗菌肽高效开发利用的新模式,进行杂合抗菌肽的制备和应用研究。设计2条杂合抗菌肽,构建其克隆载体的基因工程菌,建立了最优的培养条件。完成抗菌肽工程菌20L发酵罐的中试,抗菌效果和饲料应用的评价,得出适宜杂合抗菌肽的仔猪饲料添加量为250mg/kg,确立了抗菌肽饲料添加剂的使用规范。本课题成果对我国高效无抗饲料添加剂的研发、应用,对健康动物生产发挥了重要的促进作用,与国内外同类研究相比居领先水平。项目在实施过程中,边研究,边推广,产生了显著的经济和社会效益。为我省高效无抗饲料添加剂的使用和畜禽健康高效饲养打下了稳固的基础。并从下面三个方面取得创新： （1）根据家蝇cecropin基因设计特异性引物,应用RT-PCR技术扩增出cDNA序列,并克隆出家蝇抗菌肽Cec Md基因; （2）应用生物信息学和分子生物学方法,设计并表达出两条具有较高抗菌活性的杂合抗菌肽CC31和CC34; （3）用乳糖替代IPTG对杂合抗菌肽CC34进行诱导表达。项目组发表论文5篇,申报发明专利1项,出版专著1部,完成硕士论文3篇。