[01120651]时钟分子DEC1对核受体信号通路的调控

1.任务来源 2013年齐齐哈尔市科学技术计划项目任务：《时钟分子DEC1对Hela细胞系核受体信号通路的调控》,项目编号SFGG-201330。研究内容自选研究了DEC1对Hela、MCF-7细胞系增殖、细胞周期、凋亡的影响,以及对核受体信号ER信号通路的影响。 2.技术性能指标 2.1 项目概述 构建了DEC1的外源表达载体,研究了DEC1对Hela、MCF-7细胞系增殖、细胞周期、凋亡的影响,以及对核受体信号ER信号通路的影响,研究结果提示DEC1作为重要生物周期节律分子除了参与哺乳动物分子钟的调节过程,也参与了对肿瘤细胞的增殖、生物周期等重要的生命过程调节,过表达DEC1可以增加ERα的水平,提示DEC1参与了ER核受体信号通路的调节过程。 2.2项目主要研究内容及技术指标： （1）DEC1真核表达质粒的构建 利用RT-PCR方法, 从人乳腺癌MCF-7细胞的总RNA中调取1.2Kb的DEC1基因, 扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定, PCR结果显示与DEC1基因理论值大小一致的特异性条带。 （2）Western blot检测转染细胞中DEC1、cycinD1蛋白表达水平 用Western blot检测对各组细胞中DEC1、cycinD1蛋白表达进行定量测定。结果显示:pEGFP-N1-DEC1组细胞中DEC1蛋白表达较pEGFP-N1及空白对照组明显增多, 且差异具有统计学意义（P＜0.05）。而pEGFP-N1及空白对照组比较,DEC1蛋白的表达无显著差异 （P＞0.05） 。 （3）MTT检测DEC1对Hela细胞系增殖的影响 MTT检测细胞增殖率,与空白对照组和pEGFP-N1组比较, pEGFP-N1-DEC1组490nm处光吸收值在培养48h后开始明显降低,且差异具有统计学意义（P＜0.05）; （4）Western blotting检测结果显示,DEC1和ERα共转染与单转染ERα组比较ERα蛋白水平明显增高,与对照组比较差异显著,具有统计学意义（P＜0.05）。 （5）哺乳动物双杂交实验结果显示,DEC1和ERα共转染可显著激活pG5-luc的报告基因活性,DEC1与ERα在体内可能相互作用; 2.3结论： （1）过表达DEC1能够可能通过cycinD1蛋白表达水平抑制乳腺癌MCF-7细胞、Hela的细胞增殖。 （2）DEC1与ERα在体内可能相互作用,参与调节核受体ER信号通路。