[01081567]反义RNA和RNAi技术抑制多胺合成防治大肠癌的研究

大肠癌是常见恶性肿瘤，尚无有效的根治方法。多胺是细胞增殖介导物质，其合成受鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷蛋氨酸脱羧酶(AdoMetDC)调控，在肿瘤等增殖活跃组织ODC和AdoMetDc都显著升高。用两种酶的竞争性抑制剂抑制多胺合成对大肠癌进行化学预防和治疗已有尝试，但因其副作用大，未能进入临床研究。该成果采用基因治疗策略，以ODC和AdoMetDC为靶点，探讨新的大肠癌防治方法，主要研究内容如下：(1)研制抗人ODC单抗，建立ODC和AdoMetDC蛋白及mRNA检测技术，并从基因转录和翻译水平检测证明国人大肠癌的发生发展与ODC和AdoMetDC基因表达增强密切相关。为大肠癌基诊断和治疗技术的建立提供了理论依据和技术对策。(2)利用基因克隆技术研制成功人ODC单反义和ODC/AdoMetDC双反义重组腺病毒载体系统，获得高滴度的反义RNA表达腺病毒载体。体内外实验证明所得重组腺病毒能成功抑制ODC和ODC/AdoMetDc的表达，显著减少多胺合成，诱导P21表达，抑制cyclinD1表达，使细胞周期阻滞于G1期，具有抑制大肠癌细胞生长和侵袭的效果，双反义重组腺病毒效果更佳。(3)研制成功介导人ODC基因沉默的慢病毒载体系统，获得高滴度的慢病毒ODC基因RNAi载体系统，用病毒转导细胞的方法，建立ODC稳定沉默大肠癌细胞系，裸鼠移植瘤实验证明慢病毒介导的RNA干扰技术沉默人ODC基因表达能有效治疗大肠癌。该项目中ODC单反义和ODC/AdoMetDC双反义重组腺病毒及ODC基因沉默的慢病毒载体系统及ODC基因沉默LoVo和HT29细胞系均系国内外首先报道。这些表达载体的构建及其抗癌研究为大肠癌的基因治疗研究提供了理论依据和技术对策。对其它多胺过表达的恶性肿瘤也有防治效果。该成果已公开发表相关论文17篇，其中SCI收录论文8篇，影响因子14.885分(2005)；学术会议交流3篇。论文被引用40篇次，SCI引用19次(他引15次)，所构建的载体已无偿提供多位学者进行进一步研究。