[01080680]皱纹盘鲍四倍体培育新技术

针对鲍四倍体难以发育存活的问题，该课题采用细胞工程和基因工程技术，研究了一种新的培育多倍体技术，并取得了重要进展。该课题于2002年正式启动，于2004年获得滚动支持，并于2005年11月通过了科技部组织的课题验收。皱纹盘鲍四倍体培育新技术：研究建立了二倍体载体法培育鲍四倍体的技术路线-细胞显微移植法和化学诱导法，建立了皱纹盘鲍胚胎细胞移植技术，移植、诱导和培育并获得了二/四倍体嵌合体。将尚未分化的胚胎细胞融合成为四倍体细胞，将四倍体细胞移植到二倍体早期胚胎中，利用二倍体可以正常变态发育，来越过四倍体难以发育存活的障碍，从而获得二倍体和四倍体的嵌合体，筛选生殖腺组织含有四倍体细胞的成体鲍作为亲本，繁育得到完全四倍体鲍，或与普通二倍体鲍杂交产生三倍体用于生产。已培育嵌合体成体1016只和稚鲍1.2万只，经核仁计数和流式细胞仪检测，其中二/四倍体嵌合体成体约566只，性腺组织含有四倍细胞的二/四倍体嵌合体约141只。皱纹盘鲍基因转移技术：常规基因转移方法，如显微注射法、普通精子载体法、脂质体法和电脉冲法等，因为基因转移效率低或者操作过于复杂而难以在海洋贝类生物中得到应用。该课题开发了一种新的简便而又高效的基因转移技术-PEI介导的精子载体技术，并将之应用于皱纹盘鲍的基因转移，克服了该问题。用PEI介导的精子载体技术将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入了皱纹盘鲍胚胎，获得表达之后，再用去膜剂将转基因胚胎除去卵膜，并分散化获得转基因胚胎单细胞，再用显微操作技术将转基因胚胎单细胞移植到普通二倍体胚胎中，获得了转基因嵌合体，实现了用绿色荧光蛋白转基因技术来标记和检测嵌合体胚胎。该课题国内发表论文4篇，国外1篇；申请国家发明专利2项；培养博士1名，硕士2名。